质粒转染细胞

pl198242：请问各位大侠：用质粒提取试剂盒从大肠杆菌中提取质粒后，想用于细胞转染，还需要另外的操作来除菌么？ 另外是否还需要纯化？

丁香园网友boboyuan认为：

不需要，当然，前提是你提取质粒时操作是规范的。

提完的质粒放－4度保存，转染的时候直接用就行了。

丁香园网友hzh_0796认为：

看你是用什么方法提得，纯度如何

我用小提的时候发现，最后一步用洗脱液洗时将吸附柱放进一个新的EP管时盖子居然盖不上，硬着头皮这样拿去离心，自己都不放心用。后面测了下浓度好低，只有89微克每毫升。看来小提只适合酶切测序等。

而我用无内毒素大提试剂盒时，就没出现这种情况，溶度有1000多微克每毫升。

所以，建议：

1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒

2.已小提，想纯化滤菌用于转染建议参考

“将质粒溶液进行浓缩，每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀，冷的无水乙醇沉淀质粒，10 000r/min离心5min，弃去上清，用70% 的乙醇洗1次，无菌条件下真空干燥，以灭菌生理盐水溶解质粒至质

量浓度为1 微g/微L，一20度保存。质粒转染前，行酶切及测序鉴定。”