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        钙转12小时后细胞死亡

        互联网

        4772

        羽缎:我用磷酸钙转染293T细胞,以前做得都好好的,但最近有好几次都转染后八到九小时换液,发现细胞不但不增殖,反而死了2/3,排除细胞污染的原因,HBS也换了,都找不到原因。

        丁香园网友wfayew认为:

        转然后8-9h?我们都是16小时

        那么短的时间细胞还没有适应转染环境吧可能影响转染效率

        肉眼观察你的沉淀是否均匀?如果混合时不小心的话形成大块沉淀对细胞刺激还是很大的

        做没有质粒的对照组看是否转染试剂的原因

        293T养一段时间以后,细胞会老化生长状态和转染效率都会有变化可以重新复苏细胞

        丁香园网友羽缎认为:

        我说的8-9小时,指的是加入钙后8-9小时后换液,听师兄说,这样是为了避免钙对细胞的刺激,将media换成新鲜的media。

        我这批细胞是复苏的一批新细胞,有没有可能冻融细胞将其的转染效率降低了?有什么需要在冻存细胞时注意的么?

        还有HBS的PH值,是否是造成细胞死亡的原因呢?

        我的这批293T细胞内部有很多黑点,也不动,看上去似乎是代谢物,但是我不是太确定,实验室其他人的细胞也都有这样的情况,但是他们的细胞在转染后并没有死亡。只有我出现这种情况。

        实在想不通了,还请大家帮忙一下啊。

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