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免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）基本实验步骤：（1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清；（2） 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；（3）免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次；最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10分钟；（4）SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。

对于Western Blotting实验而言，样品处理是关键步骤之一，获得的蛋白样品必须均质、可溶，并解离成单个多肽亚基，且尽量减少相互间的聚集，使其最终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时，需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器（如核抽提物），或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等。

Before starting protocol：1. Measure out 75 mg of oligo dT cellulose into a 2 ml Sarstedt screw cap tubes.2. Make fresh buffers:……

Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly（A）+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。由于mRNA末端含有多poly（A）+,当总RNA流径oligo（dT）纤维素时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异的吸附在oligo（dT）纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo（dT） 纤维素柱，可得到较纯的mRNA.

Prepare or collect between 2x107 cells for each mRNA prep （will yield about 10-20μg of mRNA）. If PBMCs from a whole blood sample are to be used, the sample should be prepared with Ficoll-Paque according to the manufacturer's protocol. The isolated PBMCs can then be used in this protocol.

为了获得高质量的真核细胞mRNA, 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。

由于mRNA末端含有多poly（A）+,当总RNA流径oligo（dT）纤维素时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异的吸附在oligo（dT）纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo（dT） 纤维素柱，可得到较纯的mRNA。

mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3‘末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下，mRNA被洗脱，经过两次寡聚（dT）纤维柱后，即可得到较高纯度的mRNA。

使用该试剂盒，mRNA产量极低，因此下述方法是以Promega公司试剂盒操作手册为基础，并采用储昭晖硕士（作物遗传改良国家重点实验室植物分子生物学水稻分室）所建议的改进方法综合而成。

Reagents 1 U/ul DNase I from Epicentre Technologies 10X DNase I buffer （200 mM Tris pH 8.4 20 mM MgCl2 500 mM KCl） For 1ml: 200 mM Tris pH 8.4 200 ul 1M Tris pH 8.4 500 ul 1M KCl 20 ul 1 M MgCl2 280 u ...

Overview Most RNA extractions procedures yield RNA with minimal or no contamination with DNA that is suitable for applications such as northern blot constructions of cDNA libraries or microarray hybri ...

Background: mRNAs （messenger RNAs） comprise only a small percentage of all RNA species in a eukaryotic cell in Neurospora usually ~ 1-6 % （Lucas et al. 1977; Sturani et al. 1979）。 For some application ...

尽管现在人们可以越来越准确地预测microRNA的沉默效果，但还是需要高通量而且准确的直接验证技术来验证microRNA的沉默效果。microRNA这个在生物科学史上具有重要意义的小分子，在2008年又一次成为了世人瞩目的焦点。microRNA通过与目标mRNA的3’UTR区域结合来阻止其翻译，具体作用机制可分为两种：一种是降解目标mRNA从而达到阻止其翻译的目的，另一种则是直接抑制mRNA的翻译过程。

harvard大学Jeffrey K. Ichikaww编写的Human RNA Extraction protocol(哈佛RNA提取方法)。

细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。

为了获得高质量的真核细胞mRNA, 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。

核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3,5-二羟基甲苯（地衣酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量，再计算出RNA含量。

呼吸速率是植物生命活动强弱的重要指标之一。常用于植物生理研究及农业生产实践等方面。测呼吸速率的方法虽很多，但不外乎测定CO2的释放量或O2的吸收量两类方法。本实验用广口瓶法测定植物的呼吸速率，并比较不同萌发阶段小麦种子及幼芽的呼吸速率。

植物净同化率是指植物个体或小群体在一段时间（数天）内，单位叶面积在单位时间积累同化物的多少。该值除去了植物呼吸消耗，因此叫做净同化率。它可反映植物个体或群体在一个时期内的光合特性。