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随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法，尤其是DNA探针和多聚酶链反应技术的发展和应用，明显提高了细菌的诊断水平。

消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法，而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。

细胞培养的操作视频。

动物细胞培养开始于本世纪初。1962 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等, 已成为医药生物高技术产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的50% 。动物细胞大规模培养技术是生物技术制药中非常重要的环节。目前, 动物细胞有悬浮培养和贴壁培养.技术水平的提高主要集中在培养规模的进一步扩大、优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率与保证其质量上。

细胞/组织裂解液：1. 溶液准备：2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） 20% （ v/v ） 甘油 4.6% （ w/v ） SDS 0.02% 溴酚蓝；2%DTT；PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50mM NaCl，2.7mM KCl；RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl ...

免疫荧光显微法：溶液准备：PBS（pH7.4）：10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4,50mM NaCl,2.7mM KCl实验步骤：1 . 用盖玻片将12孔板盖上，细胞培养至50%浓度。2 . 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。……

免疫共沉淀方法：溶液准备：RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl pH7.4 ,150mM NaCl ,1mM EDTA,1%Triton×100,1%去氧胆酸钠，0.1%SDS,1mM PMSF,1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 （ aprotinin ） , 1μg/ml亮抑蛋白酶肽 （ leupeptin ）。PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4 ,50mM NaCl ,2.7mM KCl。1×样品缓冲液：65mM Tris-HCl （ pH8.0 ），10% （ v/v ） 甘油，2.3%（w/v） SDS,0.01% 溴酚蓝，1% DTT

百奇生物的免疫组织化学（HRP-DAB系统）：1. 溶液准备：PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl封闭缓冲液：3%BSA-PBS2. 程序：1 ） 对石蜡切片进行脱蜡和水化：3×10min 二甲苯，5min 100%乙醇，5min 95%乙醇，5min 80%乙醇， 5min 70%乙醇，3×5min PBS.……

Western-Blotting方法：膜的准备：将PVDF膜切成条浸在甲醇中，室温条件下在摇床上摇1min,去除甲醇后加入1×TBST备用。B. 膜转印：1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳2. 用夹心法电转至PVDF膜3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润……

夹心ELISA溶液准备： 包被液：50mM Na2CO3（ pH9.6 ）， 20mMTris-HCl( pH8.5 ） 或10mM PBS （ pH7.2 ）封闭液：一般封闭用BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等洗涤液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸盐缓冲液或者Tris盐缓冲液 （ pH7.4 ）AKP偶联的链球菌亲和素溶液：用1×封闭液稀释酶偶联物

间接ELISA溶液准备：包被液：50mM Na2CO3 （ pH9.6 ），20mMTris-HCl （ pH8.5 ） 或10mM PBS （ pH7.2 ）封闭液：一般封闭用BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等洗涤液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸盐缓冲液或者Tris盐缓冲液（ pH7.4 ）

用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。

固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的，去除保护基团后，再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上，它可以被裂解下来。通常情况下，在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团，一般采用哌啶去FMOC保护基团，肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸，比如三氟乙酸，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。

细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些 ...

一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）：1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化 ...

细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些 ...

细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。

培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。

体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。

细胞凋亡检测-形态学：1、光学显微镜和倒置显微镜2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜3、透射电子显微镜观察