• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        多肽制备

        互联网

        5509

        固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。

        FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的,去除保护基团后,再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上,它可以被裂解下来。

        通常情况下,在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团,一般采用哌啶去FMOC保护基团,肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。

        1. 合成步骤:

        步骤溶液或溶剂循环数时间
        1DMF2次30s
        2含20%哌啶DMF溶液1次5min
        3DMF1次30s
        4含20%哌啶DMF溶液1次10min
        5DMF6次30s
        6Fmoc-AAFHBTUHPBtNMM151次30-60min
        7DMF2次30s

        HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
        HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
        NMM: N-methylmorpholine

        2. 从树脂上分离下来:
        步骤溶液或溶剂循环数时间1DMF2次30s2含20%哌啶DMF溶液2次10min3DMF6次30s4DCM6次30s5DCM6次30s6干燥1次10min7试剂K1次2.5h
        试剂K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v)


        3. 纯化:

        RP-HPLC纯化

        ① HPLC条件:

        流动相:A)0.1%TFA水溶液

        B)0.1%TFA乙腈溶液

        梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min

        流速:1ml/min

        温度:室温(23℃)

        检测:214nm的紫外

        样品:冻干的粗品

        ② 步骤:

        a. 将粗品溶解在流动相中

        b. 注入20-30mg(2-2.5ml)样品

        c. 将主峰收集到50ml管中

        d. 冻干

        4. 鉴定:

        LC/MS条件:

        流动相:A)0.05%TFA水溶液

        B)0.1%TFA乙腈溶液

        梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min

        流速:1ml/min

        温度:室温(23℃)

        检测:214nm的紫外

        MS API:ESI

        ad image
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序