• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        百奇生物的Western-Blotting方法

        互联网

        5316

        1. 溶液准备:

        转印缓冲液:0.025M Tris base , 0.192 M甘氨酸 , 30%甲醇

        10×TBST:250mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 1.25M NaCl , 0.5%Tween20

        封闭液:1×TBST , 3%脱脂奶粉

        洗涤液:1×TBST

        2. 实验程序:

        A. 膜的准备:

        将PVDF膜切成条浸在甲醇中,室温条件下在摇床上摇1min,去除甲醇后加入1×TBST备用。

        B. 膜转印:

        1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳

        2. 用夹心法电转至PVDF膜

        3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润

        4. 在半干转印系统中10v转印2h,封闭液室温封闭1h或者4℃过夜。

        C. 抗体检测:

        1. 将一抗溶解于3ml封闭液中,终浓度为4μg/ml,4℃孵育过夜。

        2. 用洗涤液洗涤3次,每次5min.

        3. 用封闭液来稀释二抗(HRP标记的抗兔或抗鼠),室温下培育1h.

        4. 用洗涤液洗涤3次,每次5min.

        5. 用化学发光底物检测。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序