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在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果,而用不够合适的寡核苷酸时,常常得出似是而非的结果,不仅大大增加了后续实验的工作量,还可能一无所获。怎样优化设计寡核苷酸呢?至少有下列几个方面的问题需要考虑。1. 估测可能形成的DNA或RNA双链的稳定性 寡核 ...

小弟我这段时间因为实验需要,开始大量的提取脑组织的RNA.以前提取RNA都是做逆转录吊基因用,所以对于RNA的要求不算是特别严格.但是这次的实验要求RNA提取纯度和精度都比较高,所以对于RNA提取的结果也就比较关注.在前一段时间我提取RNA中一个比较明显的问题是在28s的上面会多出一条带,当时在本版上面问了很多战友,也看了相关的贴,发现这是一个比较普遍的问题,对于这条带的解释有些战友说是基因组残余,有些战友 ...

RNA提取和RT-PCR在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼 ...

这段时间做斑点杂交,因为每次做都拿着英文的翻实在太麻烦,也容易出错.为了实验方便将DIG标记检测试剂盒的说明书翻译了一份,与大家共享,如有错误,敬请指正!DNA-DIG标记：1、每个标记反应中加入10ng-3ug DNA，另加ddH2O补充至15ul体积。（未标记的对照DNA加5ul，10ul ddH2O）2、将装有反应物的离心管放入沸水中变性10min，然后迅速冷却；3、然后依次加入以下溶液：Hexanucleotide Mix, ...

重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：Hi ...

这是在网上看到的，觉得还行，大家看一下1、载体和插入片段DNA的量都要比黏末端连接时的用量多，可以增加到5倍以上。2、载体务必去磷酸化处理(许多公司都有这类酶，比如NEB的CIP(点击进入产品页面)。3、如果是PCR生成插入片段，要用产生平端片段的PCR酶(如PFU)，必须磷酸化5'末端，可以磷酸化引物，也可以磷酸化产物，我一般磷酸化产物，这一步最关键也最容易遗漏(请参考T4PNK(点击进入产品介绍)。普通Taq酶PCR ...

随着人类基因组计划的顺利进行,越来越多的新基因被发现,基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题,目前基因功能研究方法主要有基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA 干涉等。一、正常情况：DNA→mRNA→蛋白质→功能（遗传效应以及表型）二、基因功能研究策略：1、基因功能的获得（gain-of-function）如：GFP转基因鼠1）、基因转移（transgenic）：(1)、 指外源基因导入受体细胞后能随即整合到受体的 ...

使用Clontech公司的In-Fusion PCR Cloning Kit快两年了，在此谈谈心得。早期的In-Fusion PCR Cloning Kit是干粉，现在已经发展成为试剂盒，两种我都用过。相关原理和具体操作步骤可以下载公司网站的说明书http://www.clontech.com/images/pt/PT4065-1.pdf。此方法最大的优点就是不用考虑插入片段的正反性，只要链接成功就是阳性克隆。但是有时候链接效率低，比较不容 ...

加分作为鼓励，因为有的问题还需要继续讨论！谢谢！第一次做双酶切连接有90％连接成功率（挑了24个克隆），重复性也不错。兴奋之余，相与丁香园各位战友一起分享经验，因为以前得到了许多帮助。准备：目的片段PCR产物胶回收，用乙醇沉淀法纯化胶回收产物，并经紫外分光光度计计算其浓度（A）质粒同样经乙醇沉淀法纯化，测定纯化产物的浓度（B）酶切：目的片断和质粒分别进行双酶切，大约10单位酶能完全切断1μg左右的DNA片断(A/B) 1 μg酶1 ...

最近利用trisol（Qiagen公司）进行肝脏病理标本RNA抽提，按照试剂的说明书进行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的样本，置于1ml的trisol中匀浆；匀浆结束后室温放置5min左右，加入200ul氯仿，以振荡器剧烈震荡15秒混匀，室温或冰上（此处各家说法不一，我自己测试好像没有发现很大差异）放置5-10min；4度，12000g离心15min，吸取上清至新的1.5ml离心管中；在 ...

MicroRNA Interference TechnologiesBy Zhiguo WangPublisher: SpringerNumber Of Pages: 193Publication Date: 2009-08-01ISBN-10 / ASIN: 3642004881ISBN-13 / EAN: 9783642004889Description:MicroRNAs (miRNAs), endogenous noncoding regulatory mRNAs of around 22-nu ...

自己总结的RNAi干预的癌基因 75条(有部分重复) 大家一起来补全吧 最近在考虑做哪个基因 所以顺便总结了一下 大家多提意见AML1/MTG8 (205)APE1 #3ATF2 #3Bax (202)bcl-2 Antiapoptotic Esophageal adenocarcinomaBCL-2,xIAP(138, 213)BCR-AbL (136, 137)B-raf Serine/threonine kinase Malignant melanomaBRAF(V599E) (206) ...

在核酸的研究中我们总会遇到这个问题：将一段RNA序列中的U改写成T。将一段5’-3’的序列反过来书写成3’-5’。以及求一个片段的互补序列。这些事情是很简单的，但是十分消耗精力，U变T可以用Word轻松实现，反写序列据说用Excel可以实现，互补序列用各种引物设计软件。或者引物设计软件可以解决以上所有问题，但是操作还是不够简便，需要反复粘贴。这令需要设计大量引物的我深感不悦，以至于操起高中的VB课本自己编写了一个软件 ...

1.SSCP的原理：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=761629&sty=3&keywords=sscp%D4%AD%C0%EDhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/18311112.SSCP的相关资料http://www.dxy.cn/bbs/thread/18311113.SSCP的具体试验步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1831147ht ...

五十多本Humana的电子书高速下载,请大家多多支持哟!http://mamb.dvo.ru/lib/mol-methods2/abc of clinical genetics.rar 06-Aug-2003 15:17 1.6Man introduction to computational biochemistry.rar 06-Aug-2003 15:29 6.3Mantibody phage display.rar 07-Aug-2003 10:32 2.5Ma practical guide to ...

08新书：Protein Engineering (Nucleic Acids and Molecular Biology).pdfby Caroline Koehrer, Uttam L. RajBhandarySpringer | 2008-10-21 | ISBN: 3540709371 | 347 pages | PDF | 7,5 MBSite-specific mutagenesis of DNA, developed some thirty years ago, has proven to be one of the most important advanc ...

http://mededucation.bjmu.edu.cn/mc3/molecular%20clonging%203.pdfTable of Contents：Chapter 1: Plasmids and Their Usefulness in Molecular CloningChapter 2: Bacteriophage and Its VectorsChapter 3: Working with Bacteriophage M13 VectorsChapter 4: Working with Hi ...

一.Recommendations on how to handlethe clones you receiveThe clones you receive from us are shipped as bacterial LB agar stab culture.The DH10 E.coli host that is harboring the plasmid contains a DNA insert that has been placed into LB agar (containing 20 ug/ml chloramphenicol for BAC clones and 25 u ...

在生化区引发了一篇关于AO和EB染色细胞DNA的文献，应该发在这区比较合适，这里做基因的人肯定很多，和各位交流一下，EB为啥都传得那么可怕，我从来没有查到关于EB对于哺乳动物致癌的文章，反而找到了不少文献证明了EB根本无法穿透正常完整细胞膜，也就无从插入正常活细胞的DNA，更谈不上传说中的强致癌。以下是文献，大家还可以去自己搜索，另外，让我担心的是现在很多实验室都用国产核酸染料代替EB，有些核酸染料其实就是AO ...

支持版主工作，友情整理7月1日至8月15日的无人应助帖（不规范帖出外）。年代有点久远的帖子，请您回复时同时PM给求助者:)引用yaplewang战友的一句话：七、八月是应助的淡季，，，暑假嘛，呵呵，无人应助帖比较多哦，请大家积极应助！【求助】我提ＤＮＡ时出现的这种现象会不会与抗凝剂有关？拜托了，谢谢！！作者：yugang====================【求助】斑点杂交作者：sabinewen====================【求助】用G418筛选pc ...