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打算先尝试大家都赞的原核表达系统（操作简单才是上策，反正偶不打算把残存的青春继续贡献在充满毒物的环境中了），以及目前广泛应用的大名鼎鼎的Novogen公司的pET系列。经历了一次低级错误后，在实验时最可以信赖的范博士的帮助下，终于将引物定稿。感谢英骏公司总部在进行机器调试，才让我有机会改正两天前的错误，虽然不是我毕业用的实验。入正题。设计表达载体用的引物与克隆基因用的引物是两种完全不同的思路，后者需要考虑很多 ...

Western Blot为什么必须要用内参?要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的 ...

人体的各种生理反应都是由蛋白参与和调节的，而这些蛋白的表达和活性同时也受多水平，多方面的调节。这种调节既有转录水平的，也有翻译水平。既有转录后的修饰，也可以是蛋白翻译后的修饰调节。对这些蛋白的调节也有多种的形式，包括磷酸化——去磷酸化，乙酰化——去乙酰化，羧基化，甲基化，糖基化等等。这种多水平，多方面的调节构成了人体内庞大而复杂的调节体系，精确地调节了人体内的各种生理、生化反应。蛋白的乙酰化和去乙酰化是蛋白活性调节的 ...

http://www.10150.com/com/changadhere/ns_detail.php?id=15589&nowmenuid=17102&cpath=&catid=0基于ＣＢＰ标签技术的蛋白质表达与纯化系统 （用于高水平蛋白质表达和单步骤纯化）Protein Expression and Purification System是一种简单、温和、有效的方法，包括一个含有 calmodulin-binding peptide tag 钙调蛋白结 ...

以前做的很好看的条带现在怎么做也做不出来原来的效果了，所有的液体和buffer都换了，尝试了很多次，都没见改善，大家来帮忙看看问题出在哪里？1，做的好的内参：不管齐不齐，但至少条带是一根一根的，边界很清楚，没有糊，没有影子，干净，即使中间空一个泳道，也不会出现串孔的现象。2，做的好的目的蛋白：可能拍照的原因出现了很多格子，但是不影响，目的条带是两条带，同样每跟都很清晰，没有串孔，没有拖带，边缘没有发毛发糊。以上两条是同一 ...

http://www.cellbio.com/protocols.htmlMethods and ProtocolsThis section lists online resources for cell and molecular biology research protocols. Most of the web sites focus on particular research techniques.Web sites of reagent sources often supply specific protocols ...

做了两个月的时间的 western blotting 终于出了比较好的结果。老板让整理出protocol这是写的PROTOCOL大概会有很多错误请大家指正！谢谢先WESTERN PROTOCOLA.Preparation of Samples1.Get the heads of the fly2.Stir them in the lysis buffer(4heads/10ul)3.Add 2XSDS-gel-loading buffer(4heads/10ul)4.Spin at 112 ...

各位大大， 最近小妹接到老板的任务， 要对SPITC法修饰研究进行实验， 在参考了大量的文献（15篇左右）， 总结出了如下的流程， 并且进行了实验，我会把我的实验过程和结果贴出来， 希望大家能够共同分析并且提供小妹建议， 谢谢！！以下是我试验的一个protocol，希望各位前辈能指点一下，谢谢！我用BSA（国产）1mg 做样品，大致的流程是：先溶液酶解，然后C18 ZipTip固相SPITC衍生，洗脱冻干后打MALDI。具体步骤如下：（一）溶液酶解：8 M Urea 3 ...

2D Gel Electrophoresis ProtocolLysis Buffer7M Urea2M Thiourea4% CHAPSAdd fresh: 20mM Spermine20mM DTT1mM PMSFRehydration Buffer8M Urea 2% CHAPSAdd fresh:20mM DTT0.5% IPG Buffertrace amount of bromophenol blueEquilibration Buffer6M Urea 30% Glycerol 2% SDS 50mM Tris-HCl ...

Biotechniques 1998 Apr;24(4):676-8 Related Articles, LinksSDS agarose gels for analysis of proteins.Wu M, Kusukawa N.FMC BioProducts, Rockland, ME, USA.A new agarose-based protein electrophoresis gel system is described. The system consists of a highly resolving agarose, MetaPh ...

Promoter Searching - Lecture LinksLecture 1: From mRNA to Genomic Sequence - Defining the Genomic Region• RefSeq: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/RefSeq/• NEDO: http://www.kazusa.or.jp/NEDO/• NEDO home: http://www.nedo.go.jp/bio-e/index.html• Kasuza home: http://www.kazusa. ...

(转自toda)：蛋白质结构功能区查询与分析：Pfam数据库Pfam is a large collection of multiple sequence alignments and hidden Markov models covering many common protein domains and families. For each family in Pfam you can:1. Look at multiple alignments2. View protein domain architectures3. Examine sp ...

不知这里有没有人研究PROTEOMICS中根据PEPTIDE MASS FINGERPRINT（PMF）搜索数据库来鉴定蛋白质的算法问题的。本人最近在研究其中的一种算法 probability based algorithm,其代表软件是Mascot, 其前身是MOWSE，但查了很多文献，具体谈到细节的很少，只有如下一些：“MOWSE Scoring schemeThe final scoring scheme is based on the frequency of afra ...

SDS-PAGE相关帖整理（2005年4月到7月）注：已经筛选，主要是得分帖或小生以为有参考价值的帖子。SDS的作用SDS沉淀SDS去除SDS破坏二硫键？上样缓冲液配方SDS不影响制作多抗SDS胶检测蛋白纯度各工作液的保存时间分子量胶浓度和PH切胶免疫动物电泳缓冲液配方组织蛋白提取液各成分作用AP尤应冰箱保存裂解细菌双向电泳电压时间引起的问题条纹上样量不宜太少分离胶不凝的原因确定是否表达和形成包涵体磷酸 ...

最新书籍共享Functional Proteomics: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology)By Julie D. Thompson, Christine Schaeffer-Reiss, Marius UeffingPublisher: Humana PressNumber Of Pages: 598Publication Date: 2008-07-22ISBN-10 / ASIN: 1588299716ISBN-13 / EAN: 9781588 ...

Hi guys,I have a question for you. I made a construct which had beensequenced. It is in pcDNA3.1(+) and with HA-TAA to stop. The rightsize for endogenous protein is 31kD. But when I transfected into COS-7and run western, the size always is 48kD. The endogenous protein isround 33kD (invitrogen protein ladd ...

我要做酵母双杂交，有战友在做吗，交流一下，我的QQ446357706，现在我先把我的资料给大家看看吧，我自己写的程序酵母培养：YPD: 蛋白胨20g ,酵母提取物10g ,琼脂20g葡萄糖20g或灭菌后加入葡萄糖（40% 50ml；过滤除菌/121℃,15min）,使终浓度为2%.YPDA: YPD+adenin hemisulfate(0.2% 15ml;对热不稳定，不能高温高压灭菌)，使终浓度为0.003%.SD /:（SD /完全，SD /-./././.）无氨基酸酵母 ...

Pubmed上以mass spectrum，Mass Spectrometry， electrophoresis electrophoretic等为关键词进行杂志搜索，摘录的大部分杂志。觉得有用的，请顶一顶，投投票:D不排除有遗漏或错误的地方，如有，请大家指出以修改附有杂志的相关简介，链接，07年IF等资料Electrophoresis 3.609European Journal of Mass Spectrometry 1.198Internat ...

2D proteomics has become a method of choice for comparing the complete protein profile of any two cells (be it from the same or different organisms). Isoelectric point (pI) and molecular weight are used to separate these biomolecules in two dimensions (hence the term “2D”), thereby aiding analysi ...

Lysis buffer(western)Stock solutions Working Solution working --50ml1M Tris 20mM 1ml5M Nacl 100mM 1ml0.1M EDTA 2mM 1ml1%NP-40 0.5mlWorking solution 5ml 10ml1mM PMSF 50ul(100mM) 100ul25mMNaF 50ul(2.5M) 100ul10uM ALLN 5ul(10mM) 10ul10uM ALLM 5ul(10mM) 10ul0.1mM Sodium Ortho ...