[资源][原创] 蛋白标签纯化技术——CBP（钙调蛋白结合肽）

基于ＣＢＰ标签技术的蛋白质表达与纯化系统 （用于高水平蛋白质表达和单步骤纯化）

Protein Expression and Purification System

是一种简单、温和、有效的方法，包括一个含有 calmodulin-binding peptide tag 钙调蛋白结合肽标签的pCAL 表达载体和一个用于分离的钙激酶亲合树脂，可快速敏感的捕捉标签融合蛋白。

T7 RNA polymerase-based pCAL 载体能够快速克隆钙调蛋白结合肽标签融合蛋白。CBP标记的蛋白在低浓度钙缓冲液中能够特异性的被钙调蛋白树脂捕捉吸附，并且在中性环境中能够被2 mM EGTA洗脱，这与6组氨酸亲合标签纯化体系相比反应条件要温和许多。

仅有4-kDa 大小的CBP tag 与26-kDa GST 标签相比对蛋白分子的影响非常小。在所表达的蛋白分子上包含一个凝血酶或肠激酶列解位点，依靠它可以非常方便的移除CBP标签。

在哺乳动物细胞中表达的标签纯化系统(两步纯化法用于高纯度的要求)

Mammalian TAP System

本系统同时用到了streptavidin binding peptide (SBP) 链球菌抗生物素蛋白结合肽和calmodulin binding peptide (CBP)两种标签技术。通过TAP串联亲合纯化被标记蛋白和标签蛋白。并在温和的条件下进行反应，无需蛋白酶的裂解标签蛋白，SBP、CBP就可以很容易的从亲和介质上被洗脱下来。

两步纯化第一步，用哺乳动物细胞裂解通过streptavidin层析柱，并用生物素洗脱收集。第二步，用洗脱液上calmodulin柱，然后用EGTA洗脱。因为洗脱条件温和所以标签蛋白没有被裂解下来， 这样做的好处是可以便于后续的检测和研究 如Western blotte。

CBP标签层析纯化解决方案

钙调蛋白—6组氨酸—镍离子熬合介质

CBP钙调蛋白结合肽可特异性的与钙调蛋白结合，我们构建一种在N末端含有6个组氨酸标签的重组钙调蛋白，这种6个组氨酸融合钙调蛋白可与镍离子鏊合柱特意性结合，从而形成了一种能够特意性纯化CBP标签的亲合层析体系。

钙调蛋白—琼脂糖介质

直接与琼脂糖结合的钙调蛋白分离介质，保存于0.5 M NaCl containing 0.02% thimerosal中，1mg/ml，4% beaded agarose，2-8°C。