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Cleavage Efficiency Close to the Termini of PCR FragmentsWhen designing PCR experiments in which the synthesized DNA fragment is to be subsequently digested with a restricton endonuclease, it is very important to determine how many extra nucleotides should be added to the 5'-end of the PCR pr ...

我想作RT-PCR，扩一个长度为1352kb的基因，用pcDNA3.1作载体表达。我要得到cdna全长，不知道应该怎么设计引物和酶切位点。mrna序列如下CAGGCTCTGTGTTGGTTGGAGCGAGCATGTGGGTCTGCAGTACCCTGTGGCGGGTGCGAACCCCGCCCGGCAGTGGCGGGGGCCTGCTCCCAGCTTCTGGCTGTCACGGACCTGCCGCCTCCTCCT ...

我最近跑pcr,用我的模板第一次跑出来，可后来始终不见条带。我的目的片断序列如下：ORIGIN1 accgcctccc gcaaagactt caccccaaag ctggggcgca ccccttgcac gccaccctcc61 ccccagcctg cttcttgagt cccccgcatc ccaggaccct ctctcctctg ggaggccgat121 ctccctcgga cctgctggca atagcttcct atttaagaac acccca ...

各位尊敬的大师兄:以下序列是人类某整段基因组DNA转录起始点上游2826BP长度片段,老板要我PCR出转录起始点上游1500BP片段,需要设计引物,我才开始做,希望各位高手赐教.小师妹不慎感激!!!1 tgacagaagg agaccctgtc tcaaaaataa taagaataat aattaataat aataggccaa61 accaaatacc catcaccttc tgctgtgcct cccctttccc caataaatcc agtg ...

cDNA sequence: unknownGenomic sequence: unknownBlat alignment:Length of cDNA: 5799Start in cDNA: 0End in cDNA: 5799Mismatches: 0Gaps in genomic Seq: 0 (introns included)Gaps in cDNA: 0Exon1_1: 966 bp,Product size 1081Exon1_2: 966 bp,NO PRIMERS FOUND. Trying new parameters!!!Exon1 ...

tg tctgggtctt gcacaatgac119521 aatgggtccc tgtttttccc agaggctctt ttgttctgca gggattgaag acactccagt119581 cccacagtcc ccagctcccc tggggcaggg ttggcagaat ttcgacaaca catttttcca119641 ccctgactag gatgtgctcc tcatggcagc tgggaaccac tgtccaataa gggcctgggc ...

我的试验动物是猪，在网上查的HIF的基因不是全序列，对引物设计有影响吧，如果这样不能得到引物我该怎样办？我急用求高人指点LOCUS AY485675 569 bp mRNA linear MAM 23-DEC-2003DEFINITION Sus scrofa hypoxia-inducible factor 1 alpha mRNA, partial cds.ACCESSION AY485675VERSION AY485675.1 GI:40037189KEYWORDS .SOURCE ...

我设计的引物如下：上游引物加BamHI CGGGA TCCTGTCGCA CCAAATCGTA 73.3 62.6下游引物加 XbaIGCTCTA GACATATGCC ACCAGCAACT AACATG 70.4 65.6Two primers complementarity.Max complementarity in continuous: 4 bp, free energy= 0.20 Kcal/mol5'-GCTCTAGACATATGCCACCAGCAACTAACATG-3'||||3'-AT ...

LOCUS NM_017002 1524 bp mRNA linear ROD 28-OCT-2004DEFINITION Rattus norvegicus erythropoietin receptor (Epor), mRNA.ACCESSION NM_017002VERSION NM_017002.1 GI:8393318KEYWORDS .SOURCE Rattus norvegicus (Norway rat)ORGANISM Rattus norvegicusEukaryota; Meta ...

请大家帮我评价我设计的引物，设计数次，总是感觉不满意，所以恳请大家顶力相助，我先谢谢大家了。我要克隆一个基因的一部分，sense DNA序列如下，383bp－638bp是我要扩增的目的基因，上下游多扩增15个bp关系不大，请指教。ccggcccgcg ccccgcaggc cgcccgccgc ccgcgccgcc atgggagtgg agggctgcac61 caagtgcatc aagtacctgc tcttcgtctt caatttcgtc ...

全血基因组提取过程包括：1 、裂解红细胞并沉淀白细胞。2 、裂解白细胞及其细胞核。3 、盐析沉淀蛋白，分离基因组。4 、异丙醇沉淀脱盐并浓缩。5 、70%乙醇清洗，晾干并用TE缓冲液溶解。本试剂提取的基因组DNA长度大于20kb, 可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。一、 试剂盒组成 （本试剂盒提供的试剂组分, 至少可提取20份300ul全血样本的，每种组分均有足够的富余量）1． 红细胞裂解液：20ml/1瓶。 4. TE 缓冲液（DNA溶解液）：4ml/1瓶。2． 细胞 ...

基因扩增仪器名称 生产厂商 型号 规格 参考报价 销售单位DNA扩增仪 德国BIOMETRA UNO 可配原位PCR USD5,900 华粤企业公司/华耀贸易有限公司DNA扩增仪 美国STRATAGENE RoboCycler 40 四槽结构 USD8,500 冷泉港生物科技有限公司DNA扩增仪 美国TE CHNE 　 　 　 美国NBS公司上海技术服务中心DNA扩增仪(梯度型) 美国STRATAGENE GRADIENT 40 四槽结构 USD9,800 冷泉港生物科技有限公司PCR Stratagene RoboCy ...

我是一个今年刚考上基础医学院研究生的同学，也是丁香园里的新成员。资源中大家共享的帖子我觉得挺好的，就整理了一下，方便更多同学查阅学习。下面是2004年2月14日－2006年6月12日得到版主加分的共享或有价值的帖子。1 【分享】呵呵,俺自己操刀整理的一些东西。分享给需要的战友吧，请自由传播!http://www.dxy.cn/bbs/thread/61104782 【整理】★ ★ ★ PCR讨论版建版以来部分精华贴汇总★ ★ ★http://www. ...

不会释放气体的安全制冷剂：干冰型冰袋问世干冰被广泛应用于－0℃以下温度保存要求的生物、食品的配送与保存。但是, 由于干冰在使用过程中会产生800自己体积的二氧化碳气体，存在爆炸的安全隐患，各个航空公司已经明令禁止使用作为干冰制冷剂。此外，干冰采购、储存与使用十分不方便，价格也比较高，买回来的干冰必须马上使用掉，否则很快就会挥发掉，这大大增加了配送成本。然而，由于没有合适的替代产品来保证少量货物低温配送过程中的低温，干冰 ...

深圳菲鹏生物股份有限公司位于国际化大都市——深圳，是一家以技术创新为核心竞争力的新兴高科技产业生物公司。深圳市菲鹏生物股份有限公司成立于2001年的8月，是大陆乃至亚洲地区最大免疫诊断产品的原料提供商。目前菲鹏生物的产品不仅在国内占有相当大的市场份额，同时还成功进入北美、欧洲等西方发达国家市场。菲鹏生物以研发为立足之本，公司从资金投入、人才引进、福利待遇等各方面保证研发的高速进行。公司每年拿出销售的10％进行产 ...

前几天看到loveyingzi 在PCR技术讨论版有一个旧贴子。 我是一名普通的兽医(E-mail: ydfyfdquam@163.com)，了解过一点附红细胞体。首先，loveyingzi选择研究的兔作为附红细胞体的研究动物，可能不妥。虽然我国于1981年晋希民教授就发现了家兔的附红细胞体，可是那毕竟是形态学的观测。随着最近十几年的分子生物学的发现，很多学者都以16SrRNA的基因序列来作为原核生物的鉴定基因，并且国内外的 ...

碱裂解法抽提质粒原理碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M醋酸钾 / 2 M醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。那么50mM葡 ...

测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板，合成出准确互 ...

厦门大学第二届“荧光PCR－基础与应用”研习班通知(2006年10月31－11月4日，厦门)荧光PCR技术在疾病的快速诊断、病原微生物的耐药检测和基因突变检测等领域发挥了重要的作用。为了使更多的检验人员或研究人员能够尽快掌握该技术，厦门大学分子诊断实验室将继续与国外著名科学家合作，举办第二届“荧光PCR－基础与应用”研习班。本届研习班将在成功举办第一届研习班并获得广泛好评的基础上，进一步优化完善培训课程内容，融入 ...

就小量RNA的检测而言，与传统的RNA定量检测手段（如RNA印迹分析）相比，逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)更为灵敏。实际上，这一技术足以定量单细胞的RNA水平。qRT-PCR应用的主要限制因素是结果的高不稳定性，这源于实验所用生物系统的不同，RNA提取方式的多样化以及逆转录反应和PCR效率的差异。 所有这些变量都使得实时定量PCR结果难以进行标准化处理。用于量化qRT-PCR结果的策略不止一种。其中的一种方法 ...