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        急问关于RT-PCR引物设计问题

        丁香园论坛

        1272
        我想作RT-PCR,扩一个长度为1352kb的基因,用pcDNA3.1作载体表达。
        我要得到cdna全长,不知道应该怎么设计引物和酶切位点。
        mrna序列如下
        CAGGCTCTGTGTTGGTTGGAGCGAGCATGTGGGTCTGCAGTACCCTGTGGCGGGTGCGAACCCCGCCCGG
        CAGTGGCGGGGGCCTGCTCCCAGCTTCTGGCTGTCACGGACCTGCCGCCTCCTCCTACTCCGCATCCGCC
        GAGCCTGCCCGGGTCCGCGGCGTTGTCTATGGGCACCACGGGGATCCAGCCAAGGTCGTCGAACTCAAGA
        ACCTGGAGCTAGCTGCTGTGAGAGGATCAGATGTCCGTGTGAAGATGCTGGCGGCCCCTATCAATCCATC
        TGACATAAATATGATCCAAGGAAACTACGGACTCCTTCCTGAACTGCCTGCTGTTGGAGGGAACGAAGGT
        GTTGCACAGGTGGTAGCGGTGGGCAGCAATGTGACCGGGCTGAAGCCAGGAGACTGGGTGATTCCAGCAA
        ATGCTGGTTTAGGAACCTGGCGGACCGAGGCTGTGTTCAGCGAGGAAGCACTGATCCAAGTTCCGAGTGA
        CATCCCTCTTCAGAGCGCTGCCACCCTGGGTGTCAATCCCTGCACAGCCTACAGGATGTTGATGGACTTC
        GAGCAACTGCAGCCAGGGGATTCTGTCATCCAGAATGCATCCAACAGCGGAGTGGGGCAAGCGGTCATCC
        AGATCGCCGCAGCCCTGGGCCTAAGAACCATCAATGTGGTCCGAGACAGACCTGATATCCAGAAGCTGAG
        TGACAGACTGAAGAGTCTGGGGGCTGAGCATGTCATCACAGAAGAGGAGCTAAGAAGGCCCGAAATGAAA
        AACTTCTTTAAGGACATGCCCCAGCCACGGCTTGCTCTCAACTGTGTTGGTGGGAAAAGCTCCACAGAGC
        TGCTGCGCCAGTTAGCGCGTGGAGGAACCATGGTAACCTATGGGGGGATGGCCAAGCAGCCCGTCGTAGC
        CTCTGTGAGCCTGCTCATTTTTAAGGATCTCAAACTTCGAGGCTTTTGGTTGTCCCAGTGGAAGAAGGAT
        CACAGTCCAGACCAGTTCAAGGAGCTGATCCTCACACTGTGCGATCTCATCCGCCGAGGCCAGCTCACAG
        CCCCTGCCTGCTCCCAGGTCCCGCTGCAGGACTACCAGTCTGCCTTGGAAGCCTCCATGAAGCCCTTCAT
        ATCTTCAAAGCAGATTCTCACCATGTGATCATCCCAAAAGAGCTGGAGTGACATGGGAGGGGAGGCGGAT
        CTGAGGGGCTGGGTGCAGGCCCCTCAGTTGGGGCTCCCACCTTCCCCAGACTACTGTTCTCCTCACTGCC
        TCTTCCTATTAGGAGGATGGTGAAGCCAGCCACGGTTTTCCCCAGGGCCAGCCTTAAGGTATCTAATAAA
        GTCTGAACTCTCCCTTCCAAAA

        pcDNA3.1图谱如下
        急问关于RT-PCR引物设计问题
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