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长非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸但缺乏蛋白质编码潜力的调控性RNA，其数量多，种类复杂，是近年来非编码RNA研究热点。lncRNA在真核生物基因组中广泛转录，能够与染色质修饰复合物及转录因子等多种蛋白质以及DNA或RNA相互作用，目前有功能注释的lncRNA仅有200多个，但lncRNA行使功能的方式多种多样，在生命过程的转录、调控等阶段发挥了重要的生 ...

这是本人关于分子生物学的一些基本技术方面的收藏,将陆续放上来,大家跟据自己情况取舍.如与以前有重复的,敬请谅解.PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Pri ...

（转贴自生物谷,http://www.bioon.com/Article_Show.asp?ArticleID=9947）科学家利用磁力来分离微量的DNA，且其准确度及速度都可以媲美PCR。自从1985年PCR诞生以来，就在众多检测DNA含量的方法（放射性标记法、荧光标记法等等）中，一跃而位居龙头的地位。不过PCR这个实验却是相当的复杂而且旷日废时，同时因为用到昂贵的酵素也使得它的价格昂贵了许多。虽然有着种种缺点，但P ...

PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。现将几种主要影响因素介绍如下。　　一、温度循环参数　　在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例 ...

分子生物学在医学领域中的应用越来越广泛，基因突变在肿瘤和遗传病的发生过程中的作用也日益受到重视，因此检测与遗传病及恶 性肿瘤发生有关的突变基因(mutant gene)也成为了分子生物学，医学遗传学以及肿瘤学研究 中的热点。基因突变（(gene mutation)是癌基因激活，抗癌基因失活以及遗传病发生的原因，从广义上讲，基因突变包括点突变，染色体突变和基因组突变等三种形式，后两种基因突变涉及的基因较多，可以通过光学显微镜分析 ...

PCR问题的总结pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变 ...

PCR污染与对策PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂 ...

DNA实验室解决方案之PCR室污染监测及防御2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行，这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念，将展示具有世界一流水平，符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案，本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度，但易污染一直是困扰各实验室的大问题，极 ...

基康生物TaqMan-MGB双标记荧光探针合成TaqMan-MGB 探针与传统的TaqMan-TAMRA探针比较具有以下优势：1. 提高TM值— 平均15bases可提高18℃，这样可以使探针的长度缩短，尤其对AT含量高的序列设计有很大的帮助，并且提高配对与非配对模板间的TM值差异。2.提高信噪比— 由于在探针的3’端的淬灭基团为不发光的荧光基团，并且与报告基因在空间的位置更接近，实验结果更精确，分辨率更高。3. 更简化实验— MGB探针实 ...

微孔板夹心杂交法颜色互补分析法PCR-ELISA法PCR-OLA法PCR-打点杂交法微孔板夹心杂交法：　　该法是通过一固定于微孔板的捕获探针与PCR产物的某一区域特 异杂交使产物的间接地固定于微孔板上，然后，再用一生物素 等非放射性标记物标记的检测探针与产物的另一特异性较一次 杂交，漂洗后显色即可判断结果。该法需要两个杂交过程来检测 一个产物，因此，其特异性较一次杂交的检测法高。该法已用于HBV 的检测，其敏感度可达5个HBVDNA分 ...

今天发现了一个很好的网上PCR引物银行：http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/里面有超过18万种引物序列，你只要输入基因针对的ID号（可以通过NCBI查询），这样就能得出引物序列。甚至你也可输入基因的名称，或蛋白质的名称，或者对应的Locallink都可以查到。目前引物主要针对人和小鼠的，今后将拓展到其它物种，如大鼠等。它的引物成功率达到99%，强烈推荐！这个数据库的引物设计的规则 ...

声明 ：本帖转自小木虫生物论坛 全文如下近看到很多人求关于分子克隆方面的视频，本人原来发的一个帖子也不怎么好用了，好像是纳米盘的问题，现再次把总结的视频发到网上，希望能给大家提供方便。（视频可以下载观看，本人亲测）感受态细胞的制备 http://u.115.com/file/dn6iwyka载体质粒的制备及鉴定 http://u.115.com/file/dn6iwx69染色体DNA的酶切与电泳鉴定 http://u.115.com/file/ ...

我想要的是大鼠GAPDH的一对引物，做内参用。blast出来那么多similar，能用吗？引物序列AGTTCAACGGCACAGTCAAGGantiCGCCAGTAGACTCCACGACATSequences producing significant alignments: (bits) Valuegi|22857817|gb|AC122039.4| Mus musculus BAC clone RP24-432H... 44 0.013gi|38089166 ...

请大侠帮忙看一下用下列两引物进行PCR扩增有没有可行性上游引物：5'-GCCAGACTGGGAAGAAATCTG-3’下游引物：5'-TGTGTTGGAAAATCCAAGTCA-3’基因序列：　　1 aggcagtgga gccccggcgg cggcggcggc ggcgcgcggg ggcgacgcgc gggaacaacg61 cgagtcggcg cgcgggacga agaataatca tgggccagac tgggaagaaa tctgagaag ...

高手来了啊 欢迎 多谢 帮忙看下我的这3条引物， 想选2 条。将用的是3‘RACE法 扩未知序列用的PRIMER 5 刚入门， 希望得到大家的帮助 给点意见 哪2条好呢？还是有什么缺陷， 要另设计？谢先了啊我的引物5' GTGAGAAGTTCCGTTATGC 3' seq no 67 ,length 19, Tm 50 ,GC%47.45' CGAGGAGGGAGAGGAAGAATAAACG 3' seq no 209,length 25, Tm 66 ,GC%525' CACGAACCACCAAAAAAACCCAACC 3' seq no 241 ,leng ...

基因序列如下：1 ctcctg gtgcaatgga gcgagtatta aaggtctttc attattttga aagcaatagtgagccaacca ccgaccactgtg agcccgcggc gtgaggcgtg ggaggaagcg cggctgctgtcgcccagcgc61 cgccccgtcg tcgtctgcct tcgcttcacg gcgccgagcc gcggtccgaa gtcttgctgt121 gtcacccagg ctgccagg ...

小妹从文献上找了一对引物，各种条件几乎都摸了，都出现二聚体，P不出来，请各路大哥指点迷津，引物是否可用。引物序列如下上游序列：5’-TGA CCC ACT TGC CAC CCG TGC-3’ 下游序列：5’-GCA GCA CCC CAG GGC TGG C-3’酶切位点为825，,PCR产物268bp。基因序列为 1 ccacaatagg ggcagacctg tccatccttc tctgtgggtc ccctgtacct ttctccccca61 acaggatcag acccagaggc agc ...

怎样选出最合适的Taq酶随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，我们在这儿将主要的Taq酶归归类，其性质、用途也就一 ...

——从RNA提取到荧光定量PCR完美解决方案从RNA开始到基因定量PCR的研究，已经开始成为一条经典的实验流程，其在科研、临检、进出口检验、公安系统等多种领域的应用越来越广泛。不过由于RNA提取以及荧光定量PCR实验的灵敏度和特异性要求，使得这一实验方案在实验操作、实验设计以及实验数据分析方面，对于实验人员的要求越来越高。TIANGEN公司根据多年在这一领域的研发经验，给客户提供一套规范的“从RNA提取—RT— ...

以下是我在网上查到的有关RT-PCR的资料,同丁香园的战友共享,希望对这方面实验的战友有所帮助!RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设 ...