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Protocol for competitive RT-PCRFor quantifying mRNA, we use a competitive RT-PCR protocol with internal standard RNAs. These are added in a defined quantity to the RNA sample prior to the RT reaction. The resulting standard cDNA is coamplified with the same primers as the endogenous target seq ...

各位大虾：我做巢式PCR，内外侧引物条带均不对，作了N次，还是找不道原因，请各位帮忙分析。1、引物：The fisrt pair primer:5'primer:5'CAC TAG AAT GGG CAA CTG GTA GC3'(2-24nt)3'primer:5'CCG AGT ATA CGC ACA ACG CA3'(937-956nt)The second pair primer:5'primer:5'GCC GAA TTC ATG CTC CTA TCG CGG ATT3'(ECORIsite)3'primer:5'GAC CTC ...

PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性却不同，它涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。就临床而言，大三阳检出率低、甚至于GC镜下都很多时， ...

对琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳有非常详细的介绍,对于刚接触分生大的同志很有帮助.PCR扩增产物的电泳分析　　凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.一、琼脂糖凝胶电泳:　　琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片 ...

PCR扩增技术，即聚合酶链式反应，是美国科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。 现在的PCR扩增不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。PCR扩增技术的基本原理PCR扩增，类似于DNA的天然复制过程，其特异性 ...

Panomics公司的QuantiGene2.0 产品是基于Branched DNA（b-DNA）技术，完成核酸水平的精确定量检测。它克服了传统的real-time PCR（或者q-PCR）技术中的种种不确定因素，无需抽提纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，对样本量下限无要求（只需mRNA拷贝数在检测范围内），只需将样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大即可迅速得到比real-time PCR更加精确的定量结果。除细胞、组织 ...

Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口（Genetank），引物设计窗口（Primer Design），酶切分析窗口（Restriction Sites）和纹基分析窗口（Motif）。这里我们主要介绍其引物 ...

感谢您的积极参与关于real time PCR 熔点曲线分析检测点突变real time PCR中的疑问 重组质粒的选择哪里下载rflp－pcr的protocol长片断DNA如何扩增帮忙设计引物这篇文献用的是何方法提的RNA咋回事端粒PCR为什么试验结果不能重复求助M.SssI的使用说明帮分析自行设计的引物引物设计中的疑问一步法RT-PCR和两步法RT-PCR具体有什么不同呢两种逆转录酶（AMV 和M- MLV)的 区别为什么相同的序列用 ...

请教：高保真酶 关于taq plus 求教Pfu酶作PCR的要求 Pfu扩增求救！！！！ 请问哪一种高保真DNA聚合酶比较好呢？Pfu DNA 聚合酶的问题 pfu的扩增条件！ 关于高保真酶问题？ 求助：高保真酶关于高保真酶关于高保真的酶 pfu高保真酶怎么那么难用？Pfu DNA聚合酶------常见问题 请教如何做病毒的 pfu 请教Pfu扩增2kb片段 高保真酶咋还不如普通的Taq酶?请教关于高保真酶问题哪个公司的长距离TAQ酶好?请教长片段的PCR克隆技术 求助：大片断PC ...

希望战友们积极参与，加分从优！求助变性胶的电压求助LD-PCR的原理、应用、特点求助引物设计分析如何计算hardy-Weinberg平衡的理论值 ？可以用spss软件计算吗？求助NaI提取核酸对PCR的影响做PCR过程中有谁听说过或遇到过气溶胶污染吗? 哪个质粒可以做mRNA 稳定性的测定，可以实现定向连接?外周血抽提RNA是否有时间限制？ 用限制性内切酶切片段序列是不是要比环状的载体难得多？帮助分析电泳图求助RT-PCR的 ...

精华内容，与EB相关： 电泳问题 电泳问题（2）EB的危害及安全问题： ask: DEPC AND EB 的英文全名 请问DEPC和EB的毒性何在 求助：EB有何危害？急！ 求救:EB大量污染的补救措施 PCR中涉及有毒物质的步骤 琼脂糖凝胶电泳的时候,EB的毒性问题 请问EB是不是多多益善啊 GoldViewTM DNA染料（溴化乙锭的替代品） MSP中的亚硫酸氢钠处理后... 实验用的EB都是怎么处理的呀EB的配制及使用： 急！向大家求助EB如何配制？ 溴化乙锭的浓度? 急问:已经有配好的0. ...

友情整理 11月1日～11月15日 零应助贴求助血清中提取病毒RNA进行扩增http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4774547&sty=1&tpg=20&age=0SMART RACE 高手看过来:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4774641&sty=1&tpg=20&age=0求各位帮我看看http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

过去的几年里人群中肥胖症患者的比例急剧升高。因此对脂肪细胞---脂肪组织的基本组成单位---功能的研究也不断升温。这其中大多数的研究通过从脂肪组织中提取少量的RNA来检测参与代谢调控的低丰度基因表达水平。就小量RNA的检测而言，与传统的RNA定量检测手段（如RNA印迹分析）相比，逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)更为灵敏。实际上，这一技术足以定量单细胞的RNA水平。qRT-PCR应用的主要限制因素是结果的高不稳定 ...

邹承鲁院士写他是如何读文献的无论题目从何而来，都必需紧密追踪当前有关科学领域发展的动向。从研究生时代开始，在导师 教导下，以周围同学为榜样，我就养成了每周必定去图书馆浏览最新期刊的习惯，几十年如一日，雷打不动。如果确实有事，下周必定补上。我当时有一个小记录册，登录所有对本专业重要的刊物，每期读过后，一定做记录，决不遗漏一期，直至今日。现在可以在网上阅读所有重要刊物的目录和摘要，这就更容易做到了。掌握文献、对文献进行综合， ...

前一段时间在百度中搜索，发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过，考虑到自己作荧光定量PCR工作已经了五年了，做的实验以及解决的问题远比五年前多了，因此利用过年的时间，写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想，无论对错，都是希望对相关的人员有些参考价值。荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。 普通PCR与荧光定量P ...

PCR常见问题总结PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸 ...

一 设计引物应遵循以下原则：1 引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。2 引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。上下游引物的GC含量不能相差太大。附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值时不算,但在检测互补和 ...

这里，很多经常遇到的问题，比如引物设计，PCR体系和条件，电泳条带分析等，我没有一一详细列举，因为这些原因比较容易找到，我这里列举的可能多是些容易忽略的疑难杂症，希望对大家有帮助。（说了是疑难杂症了，可能有一些看法走极端了，但是为了做出实验，怀疑一切，狗急跳墙，没事找抽也是值得的）。1.引物设计引物的参数合理控制，像发卡结构，错配，二聚体等，只要别太过分，问题应该不大，当然没有最好，个人感觉上下游两条引物的退火温度这个参 ...

PCR的优化在PCR的优化开始阶段，应用新的DNA模板，引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法，其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率。表1列举了一些通常遇到的问题和对PCR反应进行优化的一些推荐方法。表1 PCR扩增的疑难解析问题解释补救措施目的产物条带在两种阳性对照管与试验管内部呈现明显的非常模糊的带型。目的产物条带有时呈不清晰的成片 ...

文 / 屈武斌 (quwubin@gmail.com)多重PCR引物设计，一个重要的方面在模板序列的预处理，处理好了后面的引物设计将事半功倍。问题：假设我们要对6个模板（基因）序列设计6对引物，每对引物特异性的扩增特定的模板序列。针对这一问题，首先我们要设计6对引物，这6对引物要在一个体系中反应，因此彼此之间不能产生二聚体，最好它们的最佳退火温度相同，不能发生非特异扩增。要实现上面的目标，比较复杂，这里先从最基础的来说，即模板序 ...