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sophiaying 有哪位用过SB203580盐酸盐么？说是水溶，但是溶解性很差啊，我按照说明书配成10 Mg/ml，但加生理盐水50度加热了4个小时都没溶啊，期间还无数次涡流震荡，哪位能给些建议么？xiaoxiaoga 用DMSO溶解试试看，先用DMSO溶解成高浓度溶液，再用培养基或者二PBS稀释成使用液selleckchem01 SB203580一般是先用DMSO溶解作为母液储存~使用时在用反应液稀释到相应的浓度。本文 ...

stb1986 PCR产物492bp（经过测序验证），可是多次琼脂糖电泳条带却明显比500的marker要大（如图），不知原因是什么呢？GC比例为30%,可是G+C与A+C的分子量差别不大啊，请问有战友试过类似情况不？原因何在？谢谢！liupeiyanxiaohai 我也遇到过， 认为是maker不准，可以换个marker试试qst1981 我也遇到过一样的问题 我想是不是 marker的成分和咱们的loading buffer的成分不一样 ...

kadvc 我今天打算从组织中提纯线粒体，随后从中提取RNA，但是我今天进行不完，所以我想明天提取RNA，但是如何保存线粒体我不知道。我提纯线粒体用的是QIAGEN的试剂盒，最后要把线粒体放入storage buffer。然后可以保存到明天吗？多少度呢？求大神们帮助，感激不尽！！！！2004seedfive 你好！我是做植物的，不知道你说的质粒提取试剂盒是否适用，谢谢上海丰核信息技术 线粒体提取出来，最好尽快做实验。线粒体是能量合 ...

lin123heng 各位战友前辈，最近在研究一转录因子在细胞分化中的作用。想把课题在深化一下，想查找一下该转录因子的上游。请问应使用什么样的试验方法，有没有相关的参考文献。不胜感激。spyl 同样的问题，希望有人赐教浸润性生长 我也是一个初学者，不知我的想法对不对，供参考。先通过shRNA干扰找到转录因子基因的表达调控因子，再通过CHIP来寻找表达调控因子的基因。liangxiaolei 你这是要往上游推，首先通过UCSC或 ...

liupeiyanxiaohai 小女子近来开始做chip，结果pcr后input的条带很亮没问题，只是阴性对照（加的是同种属的normal IgG）也出现了条带，而且和目的抗体的差不多，后来怀疑是交联时间太长（20min）随减为5min，10min还整了个没加抗体的做对照，结果还是加IgG和没加抗体的对照都有条带出现，怎样才能阴性对照没条带，还有就是超声怎样才能避免气泡的产生呢，每次超声都有大量气泡，求高人指点。实验 ...

silencese 删选了一两个月获得的稳定转染株（带荧光）发现不发光了再删一段时间又发光这是怎么回事大家有没有碰到这样的问题有经验的能不能解答一下，谢谢了雨珠儿 你的问题问的很不清楚啊、、、、、shylook 可能丢失了吧瞬转筛稳转容易出现转移的情况silencese 稳定转染成功的细胞株是一直发光的对吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

yun126126 看了不少中药作用机制方面的论文，不少以基于-----信号通路研究---中药的作用机制研究为题目。请问各位老师，信号通路应该存在有不少条，为何选择某一个通路研究，而不选择其他的呢？是不是有什么仪器可以筛选发现药物对这个通路有作用，还是其他的原因呢？本人对这个问题不懂，请各位老师给予帮助，谢谢！fghostyun 先做一个基因芯片，通过Pathway富集分析，获取最重要的几条信号转导通路，然后通过Gene Onto ...

forsisiteryu 各位大侠：请问 ERK 1/2 MAPK 抑制剂 PD98059对总ERK 1/2有影响还是只对磷酸化的ERK 1/2有影响了？是否有文献支持？多谢！huaina120 文献有很多，PD98059是ERK通路的抑制剂，而不是MAPK的抑制剂，对其他通路没有影响。别的通路有P38等。你可以去查文献 ，很多的蛋蛋豆豆 抑制总的ERK，不让其磷酸化selleckchem01 PD98059是ERK的抑制剂，主要是抑制靶点的磷酸化水平~ch ...

诬蝳娃娃 我在HEK293细胞中表达的蛋白能在胞质中形成聚集体，我想将细胞裂解，但是又不想让聚集体变性，RIPA buffer含有1% SDS，蛋白变性能力太强了，求能够温和裂解细胞，又不使蛋白变性的裂解液配方~非常感谢！！xhjggl 可以使用附件里的方法诬蝳娃娃 非常感谢~！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

雨米儿 请问各位老师，我在看文献的时候都是看到先加PDTC预处理半小时或一小时，然后换成有激动剂的培养基，请问这个时候还需要继续加PDTC吗？（预实验：我的细胞加入PDTC孵育4小时左右就几乎全部死亡，所以应该加不了24H的PDTC）急盼回复~谢谢catherinechou 我现在也想了解nf-kb阻断剂PDTC的使用方法，想必大师你已经解决，还希望多多指导，如果能有PDTC阻断NF-κB路径的机制的相关文献，那将不胜 ...

hhjiangh 如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？gikuaile 我也有相同的问题拂风 hhjiangh wrote:如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？渴求、、、谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

指葫芦 我是一个初学者，要大量提质粒。发现实验室的离心机最高为4300rpm，可是说明书上要求13000rpm。想请问各位达不到说明书上的要求可以吗？再者，提质粒的时候不是都要低温吗？为什么说明书上说的是常温离心？望请大家帮忙帮忙，再此不甚感激！shylook 你用天根这样的kit做大抽的话因为不是考离心沉降质粒所以 我想 速度影响不大 你试试其他kit 4300rpm的话 你延长一倍时间也应该可以wwjsix 最好按照说明书来说。质粒抽 ...

cindyly267 最近在构建一个克隆，两个多月了都还没成功。具体情况如下：使用的是promega公司的Halotag载体，约3900kb。片段约500kb。酶切位点是SgfI 和 BamHI。之前用别人连了片段的载体酶切后再做载体的，无论怎么切都是自连。这次使用了公司的原始载体（带致死基因），片段也是从T载上切下来的，所以感觉载体和片段都切的没问题了，结果一个都没长（可能有自连的但是死了）。引物，酶切位点什么的都检查过了没 ...

微笑刺客521 我是想提取RNA，然后在反转录，最后做荧光定量PCR。我用的标本是Hep-2喉癌细胞株，试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit，每次收集50ml培养瓶里面的细胞，但是总是提取不出来RNA，条带上面也没有，郁闷之极，求解~athena王 难道降解了？biolinkphilic 尝试用其它提取方法，不妨用传统的提取法或许有意想不到的效果。微笑刺客521 我感觉是不是我收集细胞的时候有问题啊~或者我 ...

magichunter 研究背景：已知抑制JNK激酶的活性可以实现药效A,这已经是被反复证明的了.而目前我在实验中发现，药物A可以抑制JNK激酶的活性，并且可以实现药效A。我的问题是：如何证明药物A是通过抑制JNK激酶的活性来实现药效A的？我目前只能想到的做法是：采用JNk的特异性抑制剂处理细胞，如果可以实现药效A，则可以旁证药物A的作用途径。但是这并不能提供直接证据，因此求问是否有其他更好的办法？大鹏鸟 药物A有没有 ...

wubin6638 请问有没有操作步骤可以分享一下的MTT要求细胞数量较少而转染的时候要求细胞达到80%以上这个矛盾怎么解决呢？shylook 转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了wubin6638 shylook wrote:转染24h后可以传下代最好只做一次传代再传就不推荐了可是是瞬时转染的啊没法传代的吧shylook wubin6638 wrote:可是是瞬时转染的啊没法传代的吧短期是可以的24h传代 8h ...

hust_ggjj 第一次1%的胶，跑的图感觉不太好，所以换成0.7%的跑我觉得是dna没有提好，所以重提了一次，1%的胶第一次提dna,不知道经验，请高人指点，能不能去做pcr试试，可能是什么原因没有提出来，我的样品放在-80时间不长。。。skyhater 总dna电泳？什么目的？skyhater 这样的电泳无目的哇，p试试是可以的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

1057244563 我的重组质粒测序是对的，但是转化到另外一个大肠杆菌里涂板后长出来一片，阴阳对照都是这样，根本没有单菌落，一个划线的平板上却长出很多细小的菌落，这是什么原因啊？shylook 转化到另外一个请问另外一个 是对照哪一个讲的？一个划线的平板 是指什么lz提的问题 太模糊了不知道怎么回答你1057244563 不好意思，没说清楚。我的连接产物转化到一种大肠杆菌里，长的很好，提出质粒并PCR，测序结果是正确的。但是把提出 ...

麦宝 老师有布置作业说要找一个简单DNA分子的酶切位点，要举个实例，请问怎么找啊....月中雨 DNAstar和PRIMER相关软件说明书说明很详细！！！yxx44 1、直接在网上分析，如neb公司的网络工具nebcutter,网址如下：http://tools.neb.com/NEBcutter2/打开网站，输入序列，提交,ok可以根据自己的需要选择结果显示2、直接用软件分析，如：DNAstart,primer 5,vector NTI等等3 ...

chaleneg 对RNA正在学习中，有点搞不明白microRNA和siRNA了，两个有多少不同点呢？请高手指教啦！lwx920 推荐你去看一下，这个帖子，里面楼主归纳了很多关于miRNA知识！http://news.dxy.cn/bbs/thread/10069790?keywords=非编码RNA的研究现状PPT#10069790liubingood 我查了点资料，共同学习：小的干涉RNA（small interfering RNA; s ...