• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】lipofectamine 2000转染

        丁香园论坛

        7246
        各位大侠好。本人准备做转染细胞,用的试剂是invitrogen的lipofectamine 2000。因为是初次做,有几个问题想请教一下各位高手。谢谢!
        1。质粒DNA抽提完后(用除内毒素试剂盒),是否需要除菌。如果需要,一般用什么方法?
        2.如果是做瞬时转染,是不是可以不用线性化质粒,而是提完质粒就可以直接用于转染。如果是稳定转染,就要先酶切质粒,使其线性化,然后再转染。
        3.invitrogen的lipofectamine 2000操作说明上说,质粒和脂质体要先用Opti-MEM分别稀释配成溶液后,再混合,然后再加入准备转染的细胞孔中,我就想问此时细胞孔中的培养液是用什么培养液,是不是可以也用Opti-MEM或者无血清无抗性培养基(其它材料上看到)或细胞生长时的培养基含5-10%血清。不知各位都是用什么,可否告知配方(供我参考一下)。

        盼复!
        1.一般大抽kit都可以除菌 你要不放心 乙醚熏一下
        2.不需要线性化 稳转也不需要 ps:瞬转的话 筛稳转 比较麻烦
        3.用你养细胞的培养基 无血清
        多谢shylook的回答。我想做293T细胞的瞬转,我养它的培养基如果不加血清,293T细胞不会贴壁或贴得不好。但是不是因为转染脂质体加入4-6小时要换成含血清的培养基,所以这4-6小时是影响不大呢?
        6h是可以的
        加培养基要小心


        1, 质粒抽提好之后可以直接转染,没有问题
        2,质粒不需要线性化
        3,293T是最好转染的细胞,虽然会脱壁,但是成果率仍很高
         
        好的。谢谢两位帮忙!
        lipofectamine 2000是否可以用1640稀释,如果没有Opti-MEM的话?
        wdtx123456 wrote:
        lipofectamine 2000是否可以用1640稀释,如果没有Opti-MEM的话?
        可以
        1.去内毒素的盒子提完可以直接转染,至少我用QIAGEN的盒子大提然后用LIPO2000转的话没问题的
        2.这个不清楚,能稳定转的话瞬时好吗?
        3.转的时候标准是用无血清无抗生素培养基培养2-3小时的,然后换成有血清有抗生素的,转染试剂有一个sinofection不错的

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序