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        【求助】关于连续观察细胞内钙离子的方法

        丁香园论坛

        1741
        我的研究课题需要动态观察细胞内钙离子浓度,大概每隔10秒观察一次,想跟大虾们请教下怎么样能解决连续观察时温度的恒定问题,因为试了好多次都不行,谢谢
        您要观察多久?几分钟?几小时?

        用Fluo-4的Flexstation 或 Flipr (Molecular Devices公司)可以实时检测细胞钙流(比如加药后),可以控制温度、湿度,但是读出来的荧光信号,没有图像,而且细胞检测后就废了。

        显微镜观察的话,用一些钙染料应该也可以吧,有一些荧光显微镜操作平台是可以保温操作的(比如一些做胚胎注射的),加一个保温hood,开上每隔10s的连拍,就可以去happy了。

        关键看你要做什么,极端点的话开37度的空调,用37度的水浴回流都可以啊.
        DarrenWONG wrote:
        您要观察多久?几分钟?几小时?

        用Fluo-4的Flexstation 或 Flipr (Molecular Devices公司)可以实时检测细胞钙流(比如加药后),可以控制温度、湿度,但是读出来的荧光信号,没有图像,而且细胞检测后就废了。

        显微镜观察的话,用一些钙染料应该也可以吧,有一些荧光显微镜操作平台是可以保温操作的(比如一些做胚胎注射的),加一个保温hood,开上每隔10s的连拍,就可以去happy了。

        关键看你要做什么,极端点的话开37度的空调,用37度的水浴回流都可以啊.

        我要观察20分钟左右,用的是fluo-3,因为一直找不到好的措施,所以实验情况总不太稳定。谢谢您给的建议
        胞内Ca2+浓度测定:利用Fura-2荧光技术精确测定细胞内钙离子水平。胞内Ca2+浓度=Kd
        (F-Fmin) /(Fmax-F)×R;其中,Kd为Fura22与
        Ca2+反应的解离常数,常温下其值为224 nmol/L;F
        为实验观察到的荧光比值,Fmax是Fura22全部为
        Ca2+饱和时的荧光比值,Fmin由通过加入过量的钙
        螯合剂将钙螯合出来获得。R为380 nm处无Ca2+
        和Ca2+饱和时荧光强度的比值。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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