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        请帮忙看看引物设计是否可行,急啊在线等!

        丁香园论坛

        802
        我合成了好几对引物都因为产物的GC含量极高达74%,都没有成功,我又合成了一对引物,没有加酶切位点,想如果能P 出来就回收做摸板,大家请帮我看看,引物设计可行吗?
        上游引物:5-ATGGCGGGCGTCTGCTCTCCACCTG-3
        下游引物:5-CCACCTTGAAGTCATTCTCCAGGCGGC-3
        如果 不行,请大家帮我设计一下引物,感激不尽!我已经做了快半年了.郁闷啊!
        产物序列:
        1 tgcagcggtt ctggatggcg ttattcgtac ttttgctgcg cccattcttc cctgttccat
        61 cgcggtgcgg gcatggcggg cgtctgctct ccacctggca tccaatgaac atgtctctgt
        121 cacgcattgt caaggcggcg cccctgcgcc gcaccacgct ggccatggcg ctgggcgcgc
        181 tgggcgccgc cccggcggcg catgccgact ggaacaacca gtccatcgtc aagaccggtg
        241 agcgccagca tggcatccat atccagggct ccgacccggg cggcgtacgg accgccagcg
        301 gaaccaccat caaggtaagc ggccgtcagg cccagggcat cctgctagaa aatcccgcgg
        361 ccgagctgca gttccggaac ggcagtgtca cgtcgtcggg acagttgtcc gacgatggca
        421 tccggcgctt tctgggcacc gtcaccgtca aggccggcaa gctggtcgcc gatcacgcca
        481 cgctggccaa cgttggcgac acctgggacg acgacggcat cgcgctctat gtggccggcg
        541 aacaggccca ggccagcatc gccgacagca ccctgcaggg cgctggcggc gtgcagatcg
        601 agcgcggcgc caatgtcacg gtccaacgca gcgccatcgt cgacgggggc ttgcatatcg
        661 gcgccctgca gtcattgcag ccggaagacc ttccgcccag ccgggtggtg ctgcgcgaca
        721 ccaacgtgac cgccgtgccc gccagcggcg cgcccgcggc ggtgtctgtg ttgggggcca
        781 gtgagcttac gctcgacggc gggcacatca ccggcgggcg ggcagcgggg gtggcggcca
        841 tgcaaggggc ggtcgtgcat ctgcagcgcg cgacgatacg gcgcggggac gcgcctgccg
        901 gcggtgcggt tcccggcggt gcggttcccg gtggtgcggt tcccggcggc ttcggtcccg
        961 gcggcttcgg tcccgtcctc gacggctggt atggcgtgga cgtatcgggc tccagcgtgg
        1021 agctcgccca gtcgatcgtc gaggcgccgg agctgggcgc cgcaatccgg gtgggccgcg
        1081 gcgccagggt gacggtgtcg ggcggcagct tgtccgcacc gcacggcaat gtcatcgaga
        1141 ccggcggcgc gcgtcgcttt gcgcctcaag ccgcgcccct gtcgatcacc ttgcaggccg
        1201 gcgcgcatgc ccaggggaaa gcgctgctgt accgggtcct gccggagccc gtgaagctga
        1261 cgctgaccgg gggcgccgat gcgcagggcg acatcgtcgc gacggagctg ccctccattc
        1321 ccggcacgtc gatcgggccg ctcgacgtgg cgctggccag ccaggcccga tggacgggcg
        1381 ctacccgcgc ggtcgactcg ctgtccatcg acaacgccac ctgggtcatg acggacaact
        1441 cgaacgtcgg tgcgctacgg ctggccagcg acggcagcgt cgatttccag cagccggccg
        1501 aagctgggcg gttcaaggtc ctgacggtca atacgctggc gggttcgggg ctgttccgca
        1561 tgaatgtctt cgcggacctg gggctgagcg acaagctggt cgtcatgcag gacgccagcg
        1621 gccagcacag gctgtgggtc cgcaacagcg gcagcgagcc ggccagcgcc aacaccctgc
        1681 tgctggtgca gacgccacta ggcagcgcgg cgacctttac ccttgccaac aaggacggca
        1741 aggtcgatat cggtacctat cgctatcgat tggccgccaa cggcaatggg cagtggagcc
        1801 tggtgggcgc gaaggcgccg ccggcgccca agcccgcgcc gcagccgggt ccccagccgc
        1861 cgcagccgcc gcagccgcag ccggaagcgc cggcgccgca accgccggcg ggcagggagt
        1921 tgtccgccgc cgccaacgcg gcggtcaaca cgggtggggt gggcctggcc agcacgctct
        1981 ggtacgccga aagcaatgcg ttgtccaagc gcctgggcga gttgcgcctg aatccggacg
        2041 ccggcggcgc ctggggccgc ggcttcgcgc aacgccagca gctggacaac cgcgccgggc
        2101 ggcgcttcga ccagaaggtg gccggcttcg agctgggcgc cgaccacgcg gtggcggtgg
        2161 ccggcggacg ctggcacctg ggcgggctgg ccggctatac gcgcggcgac cgcggcttca
        2221 ccggcgacgg cggcggccac accgacagcg tgcatgtcgg gggctatgcc acatatatcg
        2281 ccgacagcgg tttctacctg gacgcgacgc tgcgcgccag ccgcctggag aatgacttca
        2341 aggtggcggg cagcgacggg tacgcggtca agggcaagta ccgcacccat ggggtgggcg
        2401 cctcgctcga ggcgggccgg cgctttaccc atgccgacgg ctggttcctc gagccgcagg
        2461 ccgagctggc ggtattccgg gccggcggcg gtgcgtaccg cgcggccaac ggcctgcggg
        2521 tgcgcgacga aggcggcagc tcggtgctgg gtcgcctggg cctggaggtc ggcaagcgca
        2581 tcgaactggc aggcggcagg caggtgcagc catacatcaa ggccagcgtg ctgcaggagt
        2641 tcgacggcgc gggtacggta cacaccaacg gcatcgcgca ccgcaccgaa ctgcgcggca
        2701 cgcgcgccga actgggcctg ggcatggccg ccgcgctggg ccgcggccac agcctgtatg
        2761 cctcgtacga gtactccaag ggcccgaagc tggccatgcc gtggaccttc cacgcgggct
        2821 accggtacag ctggtaaagc gaggagggtc tatcccccgc ggaggaggtt ttcctggagc
        2881 ttggccggtg ccagtctcca ggctcaggcg gccagggcct gcgggccggg caggccgcgc
        2941 tggtgctgg
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