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        亲和免疫组织化学技术的染色步骤

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        一.卵白素和生物素免疫 组织化学染色
        1.标记卵白素—生物素(LAB)技术
        (1)石蜡切片常规脱腊入水。
        (2)0.3%H2O2—甲醇10分钟,水洗。
        (3)PBS 洗3次。
        (4)加生物素(Biotin)标记的特异性一抗,37。C30分钟,置湿盒内。
        (5)PBS洗3次。
        (6)加酶标记的卵白素(Avidin), 37。C30分钟。
        (7)PBS洗3次。
        (8)DAB显色。
        (9)流水冲洗,复染、脱水、封片。
        2.桥式卵白素-生物素(BRAB)技术
        (1)同LAB技术(1)--(5)
        (2)加卵白素(Acidin)37。C30分钟。
        (3)PBS洗3次。
        (4)加酶标记的生物素(Biotin), 37。C30分钟。
        (5)同LAB技术(7)--(9)
        3.卵白素—生物素---过氧化物酶复合物(ABC)技术(三步法)
        (1)同LAB技术(1)--(2)
        (2)必要时胰酶消化,37。C30分钟。
        (3)蒸馏水洗,PBS洗2次。
        (4)正常羊血清(1:5-10)室温,10-20分钟。
        (5)特异性抗体适当稀释,置湿盒中37。C60分钟或4。C过夜。
        (6)PBS洗3次。
        (7)生物素化(Biotin)第二抗体,37。C20分钟。
        (8)PBS洗3次。
        (9)ABC试剂,37。C30分钟,置湿盒中。
        临用前将试剂A与试剂B等量混合,稀释为1:100的浓度,滴加于切片上。
        (10)PBS洗3次。
        (11)同LAB技术(7)--(9)
        4.ABC快速法
        在大量标本染色或快速切片的免疫组化 染色时,可采用ABC快速染色法。
        (1)同LAB技术(1)--(3)
        (2)PBS洗3次。
        (3)用含4%BSA和1%正常血清的PBS作用2分钟。
        (4)特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液孵育15分钟。
        (5)PBS洗3次。
        (6)同LAB技术(8)--(9)
        特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液的配制:于染色前30分钟用等体积的生物素化IgG—ABC混合,然后加入经适当稀释的特异性抗体。

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