肝脏油红O的染色步骤

1. 油红O染色液的配制

油红O染色液分储备液和工作液。

①油红O储备液的配方：100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉，充分溶解，过滤，4度避光保存。

②油红O工作液的配方：实验前，将储备液与蒸馏水按3:2稀释，过滤（滤纸或极性滤膜配1mL注射器），酒红色且无沉淀。现配现用原则，避免工作液出现沉淀。

2. 60%异丙醇的配制

60%异丙醇的配方：100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL，4度保存。

二、动物组织的染色方法

1.冰冻切片的制作

关键步骤：

①组织固定：多聚甲醛（4 g干粉+100 mLPBS，为了加速溶解可以加热至60度或加入少量NaOH），4度保存。

②组织脱水：多聚甲醛换10%蔗糖，沉底；换20%蔗糖，沉底；换30%蔗糖，沉底。

③切片过程不做赘述，园子里有相关帖子（油红O染色用组织，例如脂肪肝、脂肪组织，应切10微米，不能太薄）。

④贴片：室温放置一会。

⑤切片保存：-20度保存。

2.组织切片的油红O染色

关键步骤：

①取出冻存的切片，室温回温，蒸馏水浸洗，洗掉包埋剂。

②60%异丙醇浸洗2min（提前润洗一下，便于油红O着色）。

③油红O工作液染色2-5min，具体时间自己控制。

④60%异丙醇调色（建议严格控制时间，时间太长颜色就褪掉了）。这一步可以在显微镜的辅助下进行，调出自己想要的颜色。

⑤调色结束后，立即水洗。

⑥苏木精复染（严格控制时间，1min以内）。

⑦盐酸酒精分化1-5s（严格控制时间，酒精可以溶解脂质）。

⑧流水反蓝。

⑨甘油明胶封片（水性封片剂）

1、油红O干液的配制:油红O干粉0.4g加入到1 OmL,异丙醇(分析纯)中，密封，置于37℃水浴加温，使其充分溶解，干液可长期室温保存。

2、油红O染液的配制:干液与三蒸水以3: 2比例混合，混匀后过滤，取滤液作为新鲜染液，此染色液2h内使用。

3、细胞处理好后，用PBS洗3次，用滤纸吸去多余水份，50%异丙醇固定1min或10%中性甲醛固定10min，

4、油红O染色液染色10－15min，染色时需加盖，以免异丙醇挥发，染料沉淀;

60%异丙醇洗去多余染液，三蒸水冲洗3次;

5、Mayer氏苏木素复染5－l0min， 1%盐酸分色及返蓝后，三蒸水漂洗1 0min。倒置显微镜下观察并拍照记录。

⑴组织用10%甲酸液固定

⑵冰冻切片厚6~10微米。

⑶用玻璃钩把切片捞入60%异丙醇，稍洗。

⑷油红O液加盖染色5~10分钟，60%异丙醇稍洗去多余的染液。

⑸蒸馏水洗。

⑹Mayer苏木精淡染细胞核。

⑺1%盐酸水溶液快速分化，水漂洗10分钟或于稀碳酸锂水溶液促蓝。

⑻贴于载玻片，把周围的水抹干。

⑼阿拉伯胶或甘油明胶封片。