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        免疫组织法

        相关实验:谷胱甘肽的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        抗生物素蛋白具有与4个生物素亲和力极高的结合点,ABC法是利用抗生物素蛋白分别连接生物素标记二抗和生物素标记的酶。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料准备

        1.  DAB-H2O2配制:以0.05 mol/l Tris-HCl(pH7.6)溶解3,3-二氨基联苯胺50 mg,使DAN终浓度为0.05%,过滤。显色时加入30%H2O2适量,使其终浓度为0.01%。

        二、实验步骤

        1.  石蜡切片或冰冻切片均可。

        2.  石蜡切片常规脱蜡,冰冻切片可用丙酮固定10 min左右,0.01 mol/l PBS(pH7.2~7.6)洗涤5 min,更换三次洗涤液。

        3.  加入兔抗GST-π,室温孵育15 min,PBS洗5 min,洗涤3次,再加入生物素标记的二抗孵育15 min,PBS洗涤5 min,洗3次。

        4.  用DAB-H2O2溶液显色,苏木素复染,常规酒精脱水,二甲苯透明后封片。阴性对照用PBS代替抗GST-π抗体。

        来源:丁香实验

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