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        免疫组织化染色

        相关实验:免疫组织化染色

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一.石蜡切片免疫组化染色实验步骤:
        1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置60℃ 1 小时)。
        (1)二甲苯I、II,各10 分钟。
        (2)梯度酒精:100%,2 分钟® 95%,2 分钟® 80%,2 分钟® 70%2 分钟。
        (3)蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。
        2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2O2,室温10 分钟(避光)。
        3.蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。
        4.抗原修复:
        根据待检测的抗原,选择适当的方法。
        附:抗原修复液(10mM pH 6.0 枸橼酸钠缓冲液)的配制
        (1)储备液的配制:
        A 液:枸橼酸三钠-2H2O 29.41g + 蒸馏水1000ml
        B 液:枸橼酸21g + 蒸馏水1000ml
        (2)工作液的配制:A 液82ml + B 液18ml + 蒸馏水900ml
        抗原修复的方法:
        (1)高压锅处理技术:枸橼酸钠缓冲液(10mM,PH6.0),淹没切片,盖上锅盖,高压锅内煮沸,上汽3 分钟后缓慢冷却(可用自来水在高压锅外冲,以助冷却)。
        (2)微波处理技术:用塑料切片架,置于塑料或耐温玻璃容器内,枸橼酸钠缓冲液淹没切片,选择中高或高档,5 分钟;取出并补充已预热的枸橼酸钠缓冲液;再选择中高或高档,5 分钟(. 最佳温度为92~95℃)
        (3)酶消化处理:此略。
        抗原修复的注意事项:
        (1)组织不能干。
        (2)选择抗原修复方法要因抗体而异。
        (3)该方法主要用于10%福尔马林固定、石蜡包埋组织。
        (4)抗原修复后至DAB 显色的过程中,均需用PBS 缓冲液。
        5.PBS:5 分钟,2 次(置于摇床)。
        6.正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分(保持组织呈湿润状态),滴加正常山羊或兔血清(与第二抗体同源动物血清)处理,37℃,15 分钟。
         

        来源:丁香实验

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