已知基因序列的获取策略——兼谈引物设计与序列分析

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引物设计 专栏：
http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm

一、如何获取已知目的基因的序列信息
先查找其蛋白相关信息,了解该基因编码产物的基本情况与功能（www.expasy.org）
进一步查找其核酸相关序列信息，常用数据库：Genebank、EBI、DDBJ

二、目的基因cDNA序列的获取方法
cDNA文库 扫描
RT-PCR
人工合成

组织RNA的提取
-在匀浆器中加工冷冻的组织
-通过注射器加工冷冻的组织
-在液氮中将组织研磨成粉末
-在液氮中研磨组织至粉末状，细胞裂解更完全，产量比前二者多一倍。
-合适的RNA提取 方法加上合适的组织处理方法，才能够获得最佳的提取效果

RNA提取 两要素
忌讳贪多 ：不能指望1ml Trizol 提取100mg以上组织，一般50mg用1mlTrizol较合适
速战速决 ：尽量缩短提取时间，不要完全照搬Protocol,比如匀浆后如果没有很多组织碎片的话，可以立即加入氯仿，立即离心，14000rpm离心10min,取完上清加入0.6~1体积的异丙醇，立即高速离心（14,000rpm,5min），..... 总之尽量快速！