【原创】新手慢病毒载体学习归纳篇

刚开始做慢病毒。在此慢慢归纳总结。

慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生RNAi干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。

1 为何用慢病毒？

在RNAi的研究中，为了感染原代细胞和难感染的细胞系，科学家开始借助于病毒载体实现RNAi；由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。而在RNAi研究需要长期观察或者需要进行动物实验时，基于慢病毒构建的shRNA的优势更为明显。

2 慢病毒的生物安全性？

1） 删除了全部HIV-1的编码基因，在介导目的基因的表达时，没有任何HIV-1蛋白的表达；
2）目前用的三代慢病毒载体，其基因组的3’ LTR的增强子功能发生了缺失，从而形成了所谓的“自灭活”（Self-inactivation，SIN），即该病毒基因组整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒，也降低了对周围基因的意外激活，因此具有较好的安全性。
3）慢病毒载体已经被全世界许多实验室应用，没有出现过任何意外，但仍具有潜在的产生复制型慢病毒（RCL）和致癌的风险，操作者在实验中仍需要保持高度警惕。

3 用于导入基因的慢病毒与用于RNAi的慢病毒载体可以通用吗？

于导入基因的慢病毒与用于RNAi的慢病毒载体不可以通用，因为他们的启动子不同，基因表达用的是聚合酶二类启动子，而干扰载体用的是聚合酶三类启动子如U6等。

4 慢病毒插入片段大小？

野生型的HIV 9.8 kb, 插入片段一般为4-5 kb可以用。

5 主要慢病毒载体？

二大公司 Invitrogen和Clontech.

Invitrogen : plenti 打头，4 Zeocin筛选，6 Blasticidin筛选，7 EmGFP

Clontech，以lenti-X打头。