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珠海舒桐医疗科技有限公司
- 服务名称:
病毒载体整合位点检测
- 规格:
1
病毒载体整合位点检测简介
慢病毒是逆转录病毒的一类,慢病毒整合到宿主细胞的染色体上可以长期稳定表达,并且与其他逆转录病毒(例如腺病毒)相比,慢病毒不但能感染分裂期细胞,而且还能感染非分裂期的细胞。基于以上优点,慢病毒载体(lentiviral vector)作为外源基因转移载体已广泛用于临床前基因研究及临床基因治疗。然而目前尚不能实现利用慢病毒载体将目的基因插入到特定位点,因此存在插入性突变致癌的风险。
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒。而重组腺相关病毒载体(rAAV) 源于非致病的野生型腺相关病毒,具有安全性好、宿主细胞范围广和在体内表达时间长等特点,目前的科学界共识是AAV不会导致任何人类疾病,因此成为目前最有前景的基因治疗载体。然而,近年来不断有研究表明AVV可将外源基因片段插入到染色体上。
病毒载体介导的外源基因随机插入的可能风险之一是其可能整合到宿主细胞的原癌基因或抑癌基因内引发插入性诱变(insertional mutagenesis),导致癌基因的激活或抑癌基因的抑制,从而诱导癌症的发生。这些潜在的副作用已经引起人们的极大关注,因此亟需发展普适的整合位点检测手段来评估以病毒为载体的基因治疗的安全性。
舒桐病毒载体整合位点检测能够特异性捕获整合位点序列,经过文库构建、二代测序及生物信息学分析,即可得出病毒载体在细胞中的整合位点。
技术路线图

LAM-seq建库原理示意图
舒桐慢病毒整合位点检测优势
(2)一站式服务,服务周期短,可提供原始数据及可视化结题报告;
样品要求
(2)DNA样品纯度:OD260/280=1.8~2.0 。
(3)DNA样品完整性:DNA无明显降解,需提供凝胶电泳检测胶图。
参考文献
2、Liang, J. et al. DeepEBV: A deep learning model to predict Epstein-Barr virus (EBV) integration sites. Bioinformatics, doi:10.1093/bioinformatics/btab388 (2021).
3、Wu, C. et al. DeepHBV: a deep learning model to predict hepatitis B virus (HBV) integration sites. BMC Ecol Evol 21, 138, doi:10.1186/s12862-021-01869-8 (2021).
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文献和实验。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装,收集细胞培养上清,通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法:定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理:慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长:慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选,常用于构建稳转株 ② 安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
相关专题 慢病毒包装技术专题 1.能介绍一下你们公司的慢病毒载体 系统吗? 答:我们公司的慢病毒载体系统由4质粒 系统组成,是在第三代慢病毒载体系统上经过进一步的优化而成。我们对部分载体上的元件进行了改造,从而提高了病毒的感染滴度,并且极大降低了病毒重组的概率,为客户提供更安全高效的病毒。 同时,我们拥有多达9种不同的包膜蛋白,是国内目前拥有最广感染谱系的生物技术服务公司。这些包膜蛋白可以帮助研究人员将目的片段导入从脑
为: 此外,IDLV 可在分裂细胞中瞬时表达,非分裂细胞中稳定表达;并且可与任何慢病毒载体配套使用,产生非整合型的慢病毒。 IDLV 的应用场景 IDLV 在应用中有什么优势呢?适用于哪些研究呢? IDLV-CRISPR / Cas9高精准地进行基因编辑 CRISPR / Cas9 是基因组编辑领域的明星技术,目前慢病毒载体(LV)是递送 CRISPR / Cas9 组分的重要手段,LV 可容纳大的 DNA 载荷并有效转导分裂和非分裂细胞,适用于绝大多数的科学研究。然而,持续表达的 CRISPR / Cas
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