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        SDS-PAGE蛋白胶银染注意事项

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        15460

        银染注意事项:


        1. 银染主要出现在胶的表面,用薄胶(0.5-0.75mm)可以提高灵敏度。


        2. 对于考马斯亮蓝染色的胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。乙酸会干扰银染,因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度银染,可用Rapid Fix脱色,并用考马斯亮蓝二次染色。


        3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。


        4. 染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40-60 rpm.


        5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程操作中都应带手套。


        6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。


        7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底,或是染色过程时温度太低。


        8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。


        9. 在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些干扰性物质。


        10. 室温操作,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。


        11. 当蛋白质中含有核酸或金属时,银染则不会奏效。改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以改进染色效果。


        12. SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。减少巯基乙醇的用量即可避免。


        13. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。


        14. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。


        15. 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。



        (责任编辑:admin)

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