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        【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

        丁香园论坛

        16952

        实验很早之前做完了,总结一下银染。希望对后人有些帮助。

        银染技术很容易掌握,做好却需要注意一些小细节。希望我犯得这些小错误你能避开,节省宝贵的时间。

        本方法适当的修改了文献中的一些方法。文献在文章末已附上。

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        一、银染前准备

        1. 银染水质很重要,最好全部双蒸水或去离子水。

        2. 装胶的器皿清晰干净,最后双蒸水多冲几遍。

        3. 操作时戴手套,不然gel上会有大手印。

        4. 跑胶时我采用大梳子,小样本量。因为银染本身分辨率就很高,样本量太大时杂带太浓。小梳子的条带比较模糊。如图

        【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

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        二、银染过程

        1. 电泳结束后,自来水冲洗玻璃板两面,预冷,剥下凝胶,双蒸水洗涤两次。

        2. 浸没于0.1% 的AgNO3溶液中,摇床银染10分钟。

        注意事项:

        a. 时间。银染时间可延迟到15分钟,但是千万不要超过20分钟,否则胶的背景极深,一个字,丑。

        b.浓度。硝酸银溶液浓度不宜超过0.15%,我的经验表明,AgNO3浓度越高,胶越黄越丑。

        3. 双蒸水冲洗两次,1min。

        注意事项:

        a. 充分的漂洗可以降低背景色。因此漂洗时间一定要到1min

        4. 浸没于1.2% NaOH+ 0.4% 甲醛溶液中显影,看到模糊的条带后立即大量双蒸水冲洗,中止显影。

        注意事项:

        a. 白色器皿,看条带比较方便。

        b.出现淡淡条带后立即中止银染。千万不要等到看到清晰的目标条带时才中止显影,那时已经显影过度,拍片时背景色极深,丑。

        c. 采用“低浓度NaOH×长时间显影”的策略。实验证明浓度较高的NaOH(浓度超过1.5%)很容易显影过度。因此不采用“高浓度NaOH×短时间显影”的策略。
        (此图采用低浓度的氢氧化钠显影,即使显影过度,也不会出太大问题。)

        【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

        d.为便于控制显影速度,得到最佳的信噪比,显影液温度不要过高(显影液提前半小时配,NaOH溶解后会释放热量,导致显影液温度过高),以10度左右为宜,温度过高则易显影过度,背景深;温度过低则显影时间延长。

        e. 显影后尽早拍片。这是早晚的差别。

        (此图为显影结束后,尽快拍的片子)分辨率较高,杂带少。

        【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

        (此图为2分钟后拍的图片)胶片会随着时间逐渐变黄,条带越来越浓,最后杂带逐渐显现,因此拍品要趁早。时间拖得越久,片子越难看。

        【原创】DNA银染经验总结【PAGE银染】

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        在操作的过程中参考此文献中的银染方法,并作了一些改进。附上此文献,供大家参考。

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