银染

一、材料与试剂

1. 99.5%乙醇

2. 100%乙酸

3. 亚硫酸氢钠

4. 硝酸银

5. 甲醛溶液（37%）

6. 碳酸钠

7. 硫代硫酸钠

8. EDTA

二、配方

1. 固定液：30%乙醇1：10%乙酸（160 ml：50 ml：290 ml H2O）。

2. 30%乙醇。

3. 感光液：硫代硫酸钠25 mg/100 ml（通常现用现配）。

4. 染色液：0.2%AgNO3（需20%AgNO3母液400 ul/40 ml）。（注意，染色液是很强的氧化剂）+3 ul/40 ml甲醛溶液（36-38%，必须现用现配）。

5. 显影液：6%碳酸钠（3 g/50 ml），4 ug/ml 硫代硫酸钠（Na2S2O3，需4 mg/ml 母液50 ul，在冰箱中可保存几周）+甲醛溶液25 ul/50 ml，必须现用现配。

溶液中不要加入过多的甲醛，否则会产生过深的背景。使用新配的硫代硫酸钠溶液（4 mg/ml），可以得到更好的结果。

三、仪器设备

1. 摇床

四、实验步骤

1. 将胶在固定液中孵育过夜，或在摇床上慢摇2小时。

2. 在摇床上用30%乙醇洗涤胶，3×10 min。

3. 用纯水洗涤胶，2×10 min。

4. 将胶孵育在感光液中1分钟。

5. 用纯水洗涤胶，2×1 min。

6. 将胶孵育在染色液中25分钟。

7. 用纯水洗涤胶1 min。

8. 将胶在显影液中，摇床轻晃2~3分钟。

9. 在有条带出现后，加入终止液。