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        非氨盐银染法

        相关实验:蛋白质染色实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中,加入100 ml 固定液,在旋转摇床中缓慢摇动30 min。
         
        2.  倾去固定液,将凝胶浸没在脱色液中,缓慢摇动30 min。
         
        3.  倾去脱色液,加50 ml 10%戊二醛,在通风橱中缓慢摇动10 min。
         
        4.  倾去戊二醛,用水彻底洗凝胶2 h,期间换水几次以保证获得低本底水平。

        5.  倾去水,以100 ml ug/ml 的DTT浸泡凝胶30 min。
         
        6.  倾去DTT溶液,不用冲洗,直接加入100 ml 0.1%硝酸银溶液,缓慢摇动30 min。

        7.  倾去硝酸银溶液,用小量水快速冼凝胶1次,然后用小量碳酸盐显影液快速洗2次。

        8.  将凝胶浸泡在100 ml 碳酸盐显影液中缓慢摇动,直至获得所需的显色水平。

        9.  每100 ml 碳酸盐显影液中加入2 ml 2.3mol/l 柠檬酸,并缓慢摇动10 min 以终止染色。
         
        10.  倾去液体,用水冼几次,缓慢摇动30 min。
         
        11.  凝胶拍照,凝胶在0.03%碳酸钠中浸泡10 min,用塑料保鲜膜包裹或密封于可热密封的袋子中保存。

        来源:丁香实验

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