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PAGE凝胶银染试剂盒(蛋白快
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RT
1年
PAGE Gel Silver Staining Kit
大龄
solarbio
G7210
1L
注:1L规格指可配制的硝酸银染色液的体积,实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。
产品简介:蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团(如琉基、碳基等)与银的结合,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙xi酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高,该产品整个过程操作简单,灵敏度高,能检测到10ng以下的蛋白条带。操作步骤:一、染色液配制需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定,一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗,染色液须用去离子水配制,现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL,可以按比例改变各成分用量。1,固定液:取40ml染色液A,10ml染色液B加去离子水至100ml,混匀;2,敏化液: 取30ml染色液A,10ml染色液D加去离子水至100ml,混匀;3,硝酸银染液:称取0.12g硝酸银,用50ml去离子水溶解,加入20ul溶液C混匀,加去离子至100ml现用 现配。4,显色液: 10ml溶液E和30ul溶液C加入去离子水至100ml,混匀,现用现配。5,终止液:取5ml染色液B加去离子水稀释至100ml,现用现配。二、染色:1,PAGE电泳结束后,将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中,用固定液固定30min。2,将PAGE胶转移至敏化液中,使染液没过PAGE胶,室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃3,弃去敏化液,用去离子水漂洗三次,每次10min。4,将PAGE胶转移至硝酸银染液中,使染液没过PAGE胶,室温摇晃40min。5,将PAGE胶转移至显色液中,使显色液没过PAGE胶,室温摇晃,该显色一般在10min左右,。6,在选择合适的时间进行终止,弃去显色液,加入终止液即可。最后可进行信号收集保存。注意事项:1. 银染主要出现在PAGE胶的表面,使用薄胶(0.5-0.75mm)可以提高灵敏度。2. 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染,因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。4. 染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40-60 rpm.5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程中都应带手套操作。6. PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底,或是染色过程时温度太低。8. 较深的银染背景多是丙xi酰胺中的杂质所致。9. PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质会干扰银染。10. 室温操作时,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。11. 凭借戊二quan预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。13. 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。14. 银染容器最理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。
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