银染实验

试剂

甲醇（50% 和5%v/v)

10umol/L二硫苏糖醇（DTT)

AgNO₃(0.1%w/v)

柠檬酸（固态)

显影液

操作程序

此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下，凝胶在旋转平台上缓慢摇动，并进行下列步骤。

1)在50% 甲醇溶液中浸泡2次，每次15 min。

2)在5% 甲醇溶液中浸泡10 min。

3)用H₂O迅速洗3次。

4)在10umol/L DTT溶液中浸泡20 min。

5)在0.1%AgNO3溶液中浸泡20min。

6)先用H₂0快速洗1次，然后用显影液洗2次，每次不超过15s。

7)在显影液中浸泡数分钟，直至显现蛋白质带。

8)加入固体柠檬酸（双水合物）（每200 ml显影液加约10 g柠檬酸)，停止显影。

9)用铝箔盖住凝胶（使避光)，继续浸泡10 min。

10)用H₂O彻底清洗。凝胶在铝箔下（在暗处）H2O中浸泡10 min。再置（暗室）H₂0中过夜，使蛋白质条带显色。

如需要，凝胶可在4% 甘油中浸泡>lh，然后干燥。