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        PAGE胶上蛋白质的银染方法

        互联网

        13704

        PAGE胶上蛋白质的银染方法有数百种,其原理相似,具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色,呈“爆炸性”反应模式,用于蛋白定量时准确性差,但其敏感度高、简便易行,仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法,可与质谱兼容。其中方法1敏感性最高,方法3背景最低、对比度好。

        1. Blam silver staining protocol (Modified)

        程序 溶液 时间
        固定 40%ETOH
        10%HAC
        1小时
        漂洗 30%ETOH 2×20min
        致敏 0.02%Na2S2O3 1min
        漂洗 H2O 3×20Secs
        染色 0.1%AgO3(预冷) 4℃,20mins
        漂洗 H2O
        H2O(更换盘子)
        3×20Secs
        1min
        显色 3%Na2CO3
        0.05%甲醛
        漂洗 H2O 20Secs
        中止 5%Hac
        漂洗 H2O 3×10min
        贮存 1%Hac,4℃

        2. EMBL Silver Staining Protocol

        程序 溶液 时间
        固定 50%MeOH
        5%HAc
        20min
        漂洗 H2O 2hr或过夜
        致敏 0.02%Na2S2O3 1min
        漂洗 H2O 2×1min
        染色 0.1%AgO3(预冷) 20mins
        漂洗 H2O 2×1min
        显色 2%Na2CO3
        0.04%甲醛
        中止 5%Hac
        漂洗 H2O 3×10min
        贮存 1%Hac,4℃

        3. Vorum Silver Staining Protocol

        程序 溶液 时间
        固定 50%MeOH
        12%HAC
        0.05%甲醛
        2hr或过夜
        漂洗 35%ETOH 3×20min
        致敏 0.02%Na2S2O3 2min
        漂洗 H2O 3×5mins
        染色 0.2AgNO3
        0.076%甲醛
        20mins
        漂洗 H2O 3×5mins
        显色 3%Na2CO3
        0.05%甲醛
        0.0004% Na2S2O3
        5mins
        中止 50%MeOH
        12%HAc
        贮存 1%Hac,4℃

        注意事项:

        1.应严格按照操作步骤进行;

        2.显色前最好更换新染色盘;

        3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去,更换新鲜显色液,一般来说染一块胶应配制500ml染液。更换2-3次;

        4.市售甲醛的浓度为37%;

        5.三种方法均与质谱兼容,Blum法敏感性高,但背景呈淡黄色,EMBL法次之但背景较低,染色点较黑。Vorum相对不敏感,但背景清晰,信噪比高

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