PCR 的花式死法
丁香园
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有人问：这个 PCR 都是怎么失败的？
拿错枪、上错样、弄错顺序、上机后忘启动 PCR 仪，总之你能想到的步骤总有人会出错。
但是在实验室摸爬滚打了一段时间，熟读 protocol，与 PCR 进行过多次正面交锋，结果仍然失败，这大概是高阶选手只犯高级错误了……
对于正常操作后，PCR 结果依然存在的问题，比如无扩增产物或扩增效率低、 出现非特异性扩增或 smear 带、扩增平坡等，你可能需要调整实验的各种步骤和条件。小编特别整理了以下解决方法，希望可以帮到大家：
问题 1：无扩增产物或扩增效率低
解决方法：
1. 不要使用包含 dUTP 和 dITP 的引物；
2. 样本浓度低，增加模板量；
3. 可能模板 DNA 降解，使用高质量的模板；
4. 增加延伸时间；
5. 增加循环数；
6. 优化退火温度；
7. 优化酶用量。
问题 2：出现非特异性扩增或 smear 带
解决方法：
1. 减少酶用量；
2. 缩短延伸时间；
3. 减少循环数；
4. 降低引物浓度。
问题 3：扩增平坡
解决方法：
1. 检查引物和 dNTP 等是否消耗完毕和 Taq 酶是否失活；
2. 底物过剩导致，可考虑延长延伸时间或添加 Taq 酶；
3. 非特异性扩增产物的竞争导致，需提高反应特异性；
4. 退火时产物的单链自己缔合导致，当产物浓度到达 10 pmol/100 μL 时即可发生此现象，需进行产物浓度稀释。
