western-blot

mushuixiaotaozi 想找一下Western blot 做的比较好的公司xhjggl 可以买个试剂盒，自己做，这样可以增加实践机会，上海生工就有。flyeryeung http://protein.dxy.cn/bbs/topic/18102961看看这个丁香园战友写的总结吧，很有帮助。mushuixiaotaozi O(∩_∩)O谢谢啦mushuixiaotaozi O(∩_∩)O谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

已寒 我现在在做beta-catenin的western blot，用的是ABCAM的抗体,但是做出来的beta-catenin总是有两条条带，想请教一下各位，beta-catenin有分不同亚型么？或者有磷酸化或非磷酸化之分么？还是有别的原因？感激不尽！！zqm1115 请问你是在做干细胞相关研究吗？已寒 不是干细胞，是一株肿瘤细胞keavin521 不是高手， 说说我的看法1。 2个bands 出来也没关系， 在你要的分子量（85kd？)的地方的有 ...

hupengfei5566 各位大虾，我最近在做K562自噬方面的研究，但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象，就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理，正常水平下自噬水平应该是比较低的，但我做的结果中第一次结果比较好，后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高，就好像诱导了一样，LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高，我在附件中放了3次的实验结果，第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不 ...

clariceerica 1,请问用多少细胞就能做出qrt-pcr呢?小笨的研究对象是被化疗药打到粒缺的肿瘤病人,最少的目标细胞理论上只有300个细胞/ml血,也不知道磁珠能不能不能把它们分出来.2,同样的细胞做western行么,如果蛋白表达量是跟notch的差不多呢?3,请问这样的问题如何解决:总RNA做相对定量qrt-pcr,但是表达的细胞只占一定比例x%,怎样将结果校正到对应表达的这部分细胞?zhujoker 根 ...

lingwu 本人做WB检测加入因子后p-AKT的变化，结果显示15分钟和30分钟条带叫空白组弱，而到60分钟条带开始增强，6小时达到高峰（较空白组高），这种情况是不是表明因子能够激活p-AKT？是不是一种迟发的激活方式，其上游是不是还有其他的信号转导过程？zhanghai123 总AKT是否也增高了？kern6549 建议重复实验，如果确实得到先弱后强的结果。个人认为加入你的因子后AKT的磷酸化过程可能比较复杂，不能简单 ...

iamgarfield 如果某受体的酪氨酸磷酸化位点众多，外加某一刺激因素，检测该受体是否发生磷酸化，一定先要把所有该受体的酪氨酸磷酸化全部沉淀下来，再用该受体的抗体去做WB（或者反向做）。如果只是把与我要研究的下游信号途径相关的几个磷酸化位点挨着做WB检测，能行吗？jz2298 买抗体就可以， western blotiamgarfield 哪种做法更全面，更能说明问题呢？因为看到国外文献绝大多数都是采用的IP,不知道是出于什 ...

lope 用WB检测beta-catenin的活性，应该是一种检测磷酸化水平，一种检测核内水平。用前一种方法可以省下一个核内参，需要同时检测非磷酸化水平的吗？而我看到的文献似乎还是检测核beta-catenin更多，请问前辈们是不是检测核蛋白更容易出结果呢？ylhuang0502 如检测磷酸化水平，LZ还需要检测总的catenin （磷酸化和非磷酸化都识别），将p-beta-catenin/total beta-catenin处 ...

ahuchxq 最近做IkBa，用的santa cruze的抗体，过去用的抗体都特别号只有一条很特异性的条带，但是最近换了相同货号的另一个批次的抗体上面总是有一天很浓的非特异性条带，配的10%的胶，12%， 8%的，都是分的不开，也尝试过跑的时间久点，可是都分的不是很开，有时候偶尔会分的比较好，就是明显能看到时两条带，很烦人，而且还很浓。不知道该怎么办？请求高人指点指点！感激不尽！karoleaf actually you don't need to ...

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况（包括时间点），那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法？加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液？ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法？A1.: 不要用胰酶消化， 贴壁细胞处理后，立刻至于冰上，用PBS洗三次后，直接加lysis buffer裂解提蛋白，lysis buffer的组分可查查文献，或在本版搜一下。Ｑ２加药前？视情况而定，一般不必要加，但 ...

olivial 最近想做caspase-3的WB，但关于caspase-3的活化有一个问题一直没弄明白，想请教。在没受刺激前，细胞内的caspase-3以procaspase的形式存在，当受到内外源性刺激时，被活化成异二聚体，该异二聚体由p12和p17两个亚基组成。但procaspase是怎样变成异二聚体的呢?是self-cleavage，还是上游信号如caspase-8、9裂解的？selenium Cleavage by gr ...

memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测，但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧：1.293T细胞转染质粒（带外源基因），24h2.无血清培养18h3.配体（外源基因是该配体的膜受体）激活，37度，10min4.PLB（promega公司）裂解细胞，做western，抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204)，以及cell signaling公司的 ...

songling8205 本人正在做蛋白检测，想知道冻存在-80度冰箱里的标本，在进行蛋白提取前用什么方法解冻，有利于减少蛋白丢失，尽可能减少对实验的影响，谢谢相关人士指导！！急求！！！！fangweibin119 把样品放在冰上songling8205 我通常是放在4度冰箱让它缓慢融化的，可是这样造成分离的单个核细胞呈团块状沉积于1.5ML的EP管中，在进行蛋白裂解时细胞团块不易溶解，我对于这个问题不知道怎么解决？求助大家， ...

shuaibo2008 各位好：我是新手，马上要提前细胞磷酸化蛋白做western。不知道在干预前细胞还要饥饿吗？饥饿对磷酸化蛋白表达有没有影响？谢谢帮助哦fangweibin119 shuaibo2008 wrote:各位好：我是新手，马上要提前细胞磷酸化蛋白做western。不知道在干预前细胞还要饥饿吗？饥饿对磷酸化蛋白表达有没有影响？谢谢帮助哦饥饿会有影响shuaibo2008 饥饿会有影响那是不是不用饥饿了还是缩短 ...

hooray365 western结果显示各种检测蛋白的量不一样，但具体多少不知道，有什么软件可以计算出来么，请高手指点，算出相对含量也可以fangweibin119 ImageQuant TL读取积分光密度值kaige88 http://signal.dxy.cn/bbs/post/view?bid=74&id=14981821&sty=1&tpg=1&age=0kaige88 另外参见http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

ahuchxq 因为最近作磷酸化的ERK的western ,我用的是Hela 229 细胞，但是比较郁闷的是，这个细胞为什么阳性对照组和没有任何处理的一组都有磷酸化的ERK？是我细胞坏了还是本来这个细胞就是这样？我用Hela 细胞试了下，对照组也有一点，但是明显比阳性对照组弱，293细胞也是。但是就是229细胞没有任何区别，我很郁闷，试了好几次都是这样，因为前期大量实验都是在229细胞上做的，所以不能选其他细胞了。。请求有经验的大 ...

zhaojunfeng1983 最近时间太紧，有哪位战友知道那个公司做信号通路（western blot）做的比较好，急啊。 AKT/PI3K方面的selenium 我们是专业性做细胞信号转导磷酸化抗体的，WWW.SIGNALWAYANTIBODY.COM,我们有800余种phospho-specific antibody，AKT/PI3K的很好，欢迎联系我，025-86975628-8012，夏先生，xsk_bio@163.comyun ...

yukituki 最近做Akt的WB遇到了问题：我用的是CST的Akt抗体以及pAkt抗体，染小鼠组织（肝，肾，脾，肺，脑等）。5%BSA（TBST稀释）4度封闭过夜之后一抗是5%脱脂牛奶稀释，1：500，过夜，二抗1：2000稀释，2-3h染出来的片子很脏，而且Akt勉强可以见到，但是pAkt没染出来条带提组织用的是RIPA（每100mg用500ul），加了PMSF以及NaF，冰上操作，裂解1h，4度离心30min，取上清。各位 ...

bowenwei P53蛋白可以用WESTERN BLOT法测定吗lnzyxyqy2003 可以啊fangweibin119 当然可以这个蛋白还是很好做的哦jgl2008 请教版主，这个p53蛋白在hela细胞中的检测如何，我做了好久，均未见条带，可否赐教下呢，感谢！忧兴逸亡 看下P53存在于细胞那个部位，是不是你没提取出来jgl2008 p53是核蛋白，我用的是单去污裂解液提的是总蛋白，以前检测过一次，出来啦的，但是条带很细，不知为何 ...

tyoutei 我做wb，ECL发光的时候，在发光液里能看到清楚的条带，但每次拿出条带准备压片的时候，条带就消失了，怎么都压不出来，请问是什么问题呢？bianbenjamin 二抗浓度过大，迅速淬灭了tyoutei bianbenjamin wrote:二抗浓度过大，迅速淬灭了谢谢！问题已经解决了，不过是提高了抗原浓度，呵呵！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

sissiwubing 我刚做的瞬转，转染效率在80%，希望通过Western看一下表达结果（应该为高表达），有未转染的细胞（应有这种蛋白）作对照。结果未转染的细胞有表达，转染的细胞都没有表达，且ß-actin均有表达。求助各位高手，可能有什么原因，非常感谢freecell 上样的总蛋白已经定量过了？每个样做了几个复孔？这个试验重复了几次？该蛋白是否本底表达水平过高？sissiwubing 上样蛋白为四个孔，为两个样分别有两个复 ...