【求助】谁能解释我自噬研究中的奇怪现象

丁香园论坛2015-08-21

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hupengfei5566

各位大虾，我最近在做K562自噬方面的研究，但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象，就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理，正常水平下自噬水平应该是比较低的，但我做的结果中第一次结果比较好，后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高，就好像诱导了一样，LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高，我在附件中放了3次的实验结果，第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不知道大家有没有在试验中碰到过这个问题

yangliangchun

请问你的自噬是什么诱导的我也在做
不同方法差异很大

wangkai0418

确定定量了吗？

seagate

你的细胞有可能污染了，rapamycin本身有抑菌作用

zhangy1027

细胞本身也有可能发生自噬吧，细胞传的多了，状态就不好了

wenjiexiaohuli

我做的图也这样，感觉LC3的稳定性很差，不同批次间的样品跑出来就会不同，可以换种好点的血清试试

dream_reloaded

hupengfei5566 wrote:
各位大虾，我最近在做K562自噬方面的研究，但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象，就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理，正常水平下自噬水平应该是比较低的，但我做的结果中第一次结果比较好，后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高，就好像诱导了一样，LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高，我在附件中放了3次的实验结果，第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不知道大家有没有在试验中碰到过这个问题

Have you used Bafilomycin A1 in your blotting? It is needed if you want to deduce how much flux is going on in a certain peoriod of time.

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