DNA基础知识

xxzjcg 请教构建载体，插于片段670bp，pcDNA3.1质粒5400bp，如果10ul连接体系，插于片段加多少？pcDNA3.1加多少？woxingwosu pcDNA3.1：片段约为1：3至1：4，其他的成分按照要求来做。xxzjcg 可是我做了1：4加的，长出几个菌，但菌落PCR是阴性的，请教可能什么原因cixinkejian 确认下你的酶切位点；直接克隆虽然省事，但是还不如先走T载体克隆，然后再连接到你的目的载体上了！r ...

mcstudent 我打算找mir-155的靶基因，在网站上是这样的，求高人指导：在http://www.mirbase.org/网站上输入file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrator/Application%20Data/Tencent/Users/270756706/QQ/WinTemp/RichOle/XQ0~4MD6R67KP$7R%7B%60~7E.jpg这时候我是不 ...

sin_007 如题。一个基因在肿瘤细胞中表达下调，而对癌细胞用5‘Aza去甲基化处理后表达更下调。这该怎么解释？本来还怀疑该基因受表观遗传调控呢，但是结果相反，不知该怎么办了。特集思广益。sunquanqiu 可以再看看Histon啊sin_007 sunquanqiu wrote:可以再看看Histon啊恩，正在考虑要不要再做做乙酰化。但是目前还没有相关文献报道，所以还没放手做。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...

云忆香香 最近分配到一个课题，但是刚开始学习，不知怎么做，请各位给点提示，谢谢！课题大致意思：已知一个质粒的目的基因序列，却不知道质粒序列，导师要求测出质粒的序列，有提示用染色体步移的方法。Ps：1，这个质粒很大，估计又20-30kb；2，目前市场上有测未知序列的试剂盒，但是最多测到3kb，我不知道用什么办法使其连续测下去；3，我的酶切位点都不知道；谢谢各位支持~zjubell 这么小的基因组，用高通量测序，很容易搞定的。20K ...

yin_xl 请教各位专家：对于终止密码突变，导致基因转录至下一个终止码才停止，这种突变引起的遗传性疾病，能否通过反义核苷酸特异性地结合在终止密码下游附近来强行终止翻译、以期产生正常的氨基酸序列？查了一下文献，没有看到资料。谢谢大家！zhujoker 这种技术在理论上现在是不行的，因为通过反义核苷酸会影响整个mRNA的稳定性，但是基因治疗是可以的yin_xl 谢谢！请问“用于基因治疗是可行的“这句话怎么去理解？是不是说通过载 ...

张振中 众所周知，端粒DNA是细胞分裂的“计数器”，随着细胞分裂次数的增加，端粒逐渐缩短，细胞走向凋亡。而端粒酶具有修复端粒DNA，延长端粒DNA长度的作用。在众多恶性肿瘤细胞中，端粒酶呈现高表达。然而有新的研究表明，在过氧化应激的条件下，端粒酶从细胞核中迁移出来并进入线粒体。端粒酶必须在细胞核中才能发挥修复端粒DNA的作用，所以端粒酶必然存在着某些尚未知晓的“细胞核外功能”。进一步的研究发现，线粒体损伤是人体衰老的重 ...

linaque 本人没做过RNA干扰，想请教一个问题，可以在整体动物上沉默某个基因的表达吗？还是只能在细胞水平沉默某基因的表达？还是说在整体水平若要沉默某基因只能通过敲基因的方法？谢谢！路得自己走 基于过表达miRNA（当siRNA用了）的转基因小鼠敲减Prnp的实验，不知是否符合楼主所说的。linaque 谢谢！kinguangjun 个人观点：基因敲除一般是在胚胎细胞水平上筛选出来（也可以用多条透导型ShRNA表达系统整 ...

cindy18180 各位好，小女子第一次做细胞转染，有许多问题想请教，请大家多多指导:)首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？急用，请教各位前辈zjubell 你应该是想做过表达吧，那你的质粒上应该有启动子的吧，比如CMV。那你只需要 ...

2425611 刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题，质粒转染细胞后，是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达？每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊？这个数量和蛋白表达多少有没有关系？还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么？菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！wanadoo 两种转染。 酶切，基因相融合。非酶切，环形形式存在表达。我用lipofedaminwoxingwosu 2425 ...

flster 如果知道某染色体的某一区域，如何知道改区域及附近编码了那些基因。如：X染色体上起始位置为72928764，终止区为 72965791的一段DNA都编码哪些基因该如何查？woxingwosu NCBI上有查基因组序列的呀，自己学习吧yake211 在 ucsc 网上查找，不过你先要搞清楚你的数据版本是 hg18 还是 hg19, 不同的版本物理位置有一定的变化。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

ono1180 求助各位同道：我想过表达一个基因，想选用一个质粒载体连接此基因再转染入细胞，选用的载体需要有绿色荧光标记，而且能筛选出稳定转染的细胞系，上网查了一下觉得pEGFP系列的好像符合我的要求。请问这个载体怎么样，大家还有什么载体觉得挺好，请指教，感谢了。xiaokangkuaile 我用的是pEGFP-C1表达载体，但我的目的基因对GFP表达有影响，转染效果很差xiaokangkuaile 现在正在做其他的目的 ...

real_madrid_146 有个选择性剪接的问题不是很懂，想请教下大家一个完整的mRNA个外显子，起始密码子在第一个外显子，终止密码子在第十一个外显子。第二个外显子选择性剪切缺失之后，随后的序列发生移码，终止密码子出现在第三个外显子了，那后面4-11个外显子还能翻译不？有没有可能后面的外显子内重新出现个起始密码子，也同样翻译？类似于原核生物的多顺反子那样。因为在genebank上可以查询到相应的序列，里面标注的 ...

zaiju512 请问有没有人知道哪能买到所有TLRs敲除的小鼠或大鼠？zaiju512 想法有点天真呵呵hzyyy zaiju512 wrote:想法有点天真呵呵文献上有报道的！C3H/Hej小鼠，去上海斯莱克问一下吧！hzyyy 补充一下，C3H/Hej小鼠是TLR4抑制的小鼠，但所有TLR敲除的没法搞，因为老鼠几乎不会活，所以从这个角度讲，2楼的兄台还是有一定道理的！洄游的鱼 大鼠基因敲除研究才刚刚开始，肯定是没有的。前面几位说 ...

huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？谢谢啊！zhujoker 聚合酶yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

吴佰霖 我的基因过表达，结合文献，推理应该是IKb alpha下降，而NFKB升高 （IKb可磷酸化NFKB，使后者降低）但现在我的结果是两者同时升高，请问可能的原因有哪些呢？谢谢woxingwosu 可否检测一下NFKB的磷酸化情况？erik NFKB是检测核内的吗？检测p65还是p50/吴佰霖 检测总蛋白，为P65本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

cdduanshui 收缩环：在有丝分裂后期中轴附近形成的激动蛋白质纤维环，负责将子代细胞分开。我也看来一些关于胞质分裂和F-actin的一些文献，但由初涉这一方面，有些英文也看得不是很明白，心里有个疑问请教各位老师;由actin形成的收缩环是不是有一面附着于细胞膜上，另一面连着myosin，然后由myosin提供动力把胞膜往里拉?麻烦老师解答下，谢谢cdduanshui 顶一下，希望老师们帮助woxingwosu Co ...

brucewu1986 我挑的阳性克隆（已检测），在加有抗生素的摇瓶中培养后，放在4度冰箱一天，枪头蘸取少量，6ml加相应抗生素管摇过夜，菌液浑浊，kit小提，测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带，酶切电泳也看不到，会不会是质粒丢失？但为啥可以在抗生素的培养基中生长？目的片段2.5kb，载体6k各位战友有没有遇到这种情况woxingwosu 我觉得一般情况下，质粒丢失的几率比较低。你是怎么检测阳性克隆的呢？如果是菌 ...

riset 看了一些文献，常用的荧光素酶质粒是pGL3，但是这个质粒图谱上，荧光素酶下游只有一个XbaI的酶切位点，不是多克隆位点，请问是如何解决克隆片段顺序问题的。谢谢。shilei5794749 用你序列的特异上游引物和RVprimer4，正向连进去菌P能扩出条带；反向连进去的扩不出条带。riset 多谢指教，另外再问下，UTR一般都比较长，不能全部克隆,一般克隆多长合适呢？还有就是PCR扩增UTR的时候是以基因组为模 ...

jiajiawonder 综述要用到这个 外显子剪接沉默子 可是不知道怎么能用简单明了的词解释清楚，求助高手~多谢~shilei5794749 Exonic splicing enhancer (ESE)An exonic splicing enhancer (ESE) is a DNA sequence motif consisting of 6 bases within an exon that directs, or enhances, accurate splicing of hetero-nuclear RNA (hnRNA) ...

cdduanshui 请问各位老师：RhoGEF和RhoA有没有什么关系的？RhoGEF到底是个什么东西，也是小G蛋白的一种吗？只知道它叫RHO型鸟嘌呤核苷酸交换因子，刚刚接触这方面的东西，请老师点拨一下，不胜感激。cdduanshui 求教求教！cdduanshui 在顶一下，老师帮帮忙woxingwosu http://www.scitopics.com/Rho_GEFs.html本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...