【求助】染色体步移法（基因位移法）测质粒全序列
丁香园论坛
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最近分配到一个课题，但是刚开始学习，不知怎么做，请各位给点提示，谢谢！
课题大致意思：已知一个质粒的目的基因序列，却不知道质粒序列，导师要求测出质粒的序列，有提示用染色体步移的方法。
Ps：1，这个质粒很大，估计又20-30kb；2，目前市场上有测未知序列的试剂盒，但是最多测到3kb，我不知道用什么办法使其连续测下去；3，我的酶切位点都不知道；
谢谢各位支持~
课题大致意思：已知一个质粒的目的基因序列，却不知道质粒序列，导师要求测出质粒的序列，有提示用染色体步移的方法。
Ps：1，这个质粒很大，估计又20-30kb；2，目前市场上有测未知序列的试剂盒，但是最多测到3kb，我不知道用什么办法使其连续测下去；3，我的酶切位点都不知道；
谢谢各位支持~
这么小的基因组，用高通量测序，很容易搞定的。20Kb的话，给他1千倍的覆盖率，也就是20M，按现在测序行情价，1G也才3－5千块钱。你的20M么，掺在人家的样品里，花不了太多钱的。
我做过一个噬菌体的160Kb的基因组，数据有点多，做了1G，结果拼接效果非常好，正好拼接成一条contig，中间有一些N，用PCR法加sanger测序补一下，成本5K，当然，不知道你的预算是多高了。
我做过一个噬菌体的160Kb的基因组，数据有点多，做了1G，结果拼接效果非常好，正好拼接成一条contig，中间有一些N，用PCR法加sanger测序补一下，成本5K，当然，不知道你的预算是多高了。
还不是很懂~还请各位高手多多帮忙！
可以采用不同的酶对质粒进行酶切，然后将酶切片段分离并插入到已知的载体中，已知载体的序列进行测序，然后拼接！
如有疑问,请联系liuguanshui@163.com
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