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        【求助】目的基因的获得

        丁香园论坛

        2334
        各位好,小女子第一次做细胞转染,有许多问题想请教,请大家多多指导:)
        首先,我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp,cds:713-2767
        我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp,适合用什么方法获得呢?用RT-
        PCR会不会太长了,扩不出来,或者效果不好?
        急用,请教各位前辈
        你应该是想做过表达吧,那你的质粒上应该有启动子的吧,比如CMV。
        那你只需要克隆编码区即可。至于获得方法,你提RNA后,逆转,用PCR即可获得,
        当然得测序鉴定。PCR引物两端,根据你的多克隆位点两端的酶切位点,设计相应的内切酶识别序列。
        普通的RT酶普遍能逆转6K以上的片段的,你的序列才2Kb,完全没问题。
        另外,现在人,小鼠等物种的基因早已经商业化了,去买一个克隆进载体的,也才3K左右,比自己做可能要省下很多金钱和精力。
        从实际操作上讲,通过逆转录扩增这段片段,会产生基因突变的可能比较大;除了逆转录方法外,也可采用基因合成的方法,把目的基因一段一段的合成,然后进行拼接;当然直接购买商业话的产品,也是一个很好的选择,如需要技术上的服务,请QQ:1095801973

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】目的基因的获得

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