【求助】目的基因的获得
丁香园论坛
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各位好，小女子第一次做细胞转染，有许多问题想请教，请大家多多指导:)
首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767
我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-
PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？
急用，请教各位前辈
首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767
我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-
PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？
急用，请教各位前辈
你应该是想做过表达吧，那你的质粒上应该有启动子的吧，比如CMV。
那你只需要克隆编码区即可。至于获得方法，你提RNA后，逆转，用PCR即可获得，
当然得测序鉴定。PCR引物两端，根据你的多克隆位点两端的酶切位点，设计相应的内切酶识别序列。
普通的RT酶普遍能逆转6K以上的片段的，你的序列才2Kb，完全没问题。
另外，现在人，小鼠等物种的基因早已经商业化了，去买一个克隆进载体的，也才3K左右，比自己做可能要省下很多金钱和精力。
那你只需要克隆编码区即可。至于获得方法，你提RNA后，逆转，用PCR即可获得，
当然得测序鉴定。PCR引物两端，根据你的多克隆位点两端的酶切位点，设计相应的内切酶识别序列。
普通的RT酶普遍能逆转6K以上的片段的，你的序列才2Kb，完全没问题。
另外，现在人，小鼠等物种的基因早已经商业化了，去买一个克隆进载体的，也才3K左右，比自己做可能要省下很多金钱和精力。
从实际操作上讲，通过逆转录扩增这段片段，会产生基因突变的可能比较大;除了逆转录方法外，也可采用基因合成的方法，把目的基因一段一段的合成，然后进行拼接;当然直接购买商业话的产品，也是一个很好的选择，如需要技术上的服务，请QQ:1095801973
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师兄微信号：shixiongcoming
