【求助】质粒丢失相关问题

丁香园论坛2015-08-21

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brucewu1986

我挑的阳性克隆（已检测），在加有抗生素的摇瓶中培养后，放在4度冰箱一天，枪头蘸取少量，6ml加相应抗生素管摇过夜，菌液浑浊，kit小提，测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带，酶切电泳也看不到，会不会是质粒丢失？但为啥可以在抗生素的培养基中生长？
目的片段2.5kb，载体6k

各位战友有没有遇到这种情况

woxingwosu

我觉得一般情况下，质粒丢失的几率比较低。

你是怎么检测阳性克隆的呢？如果是菌落PCR的话，假阳性的几率还蛮高的。
另外，需要检测一下抗生素是否失效。

zhujoker

注意摇菌时要给细菌一些新鲜的空气，因为生长时耗氧的。有的质粒提取确实会出现你这种情况！

kwj860213

一个是看看抗生素是否过期，重新制作培养基，另外琼脂糖凝胶里是否加了EB

brucewu1986

还没谢谢各位呢

这里补上了啊

dnazyme

所谓抗性标记，其实就是对付这些抗生素的，比如分解酶、修饰酶。

不含的，就被抗生素消灭掉。

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