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现象可能原因解决方案转化后无菌落生长感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于 ...

现象可能原因解决方案转化后无菌落生长感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于 ...

构建全长cDNA文库分为噬菌体文库和质粒文库，二者大同小异。无论怎样，应当注意如下几个方面： 一、保证获得数量足够的高质量的起始RNA。构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录，这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好，虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH的SMART 4的 ...

Isolation of BAC DNA from Large-scale CulturesJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center ...

Department of Crop SciencesCollege of Agricultural Consumer and Environmental SciencesUniversity of Illinois at Urbana-Champaign Purpose: After spotting cDNAs onto glass slides the slides must be trea ...

Direct labeling of total RNA with Cy3 and Cy5: A. MATERIALS RNeasy® Mini Kit (Qiagen; Cat # 74106) SuperScript II RT (200U/µL) (Life Technologies; Cat # 18064-014) QIAquick PCR Purification Kit (Qiage ...

Direct labeling of total RNA with Cy3 and Cy5: A. MATERIALS RNeasy® Mini Kit (Qiagen; Cat # 74106) SuperScript II RT (200U/µL) (Life Technologies; Cat # 18064-014) QIAquick PCR Purification Kit (Qiage ...

PAM: Prediction Analysis for MicroarraysClass Prediction and Survival Analysis for Genomic Expression Data MiningFeatures:Performs sample classification from gene expression datavia "nearest shrunken ...

第一部分TotalRNA的提取一、试剂配制 以下内容需要登录后才能完全查看，请您登录马上登陆| 企业会员注册 ...

1.试剂配制准备工作：1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins高压灭菌。3、电泳槽及电泳托、梳子用3%双氧水处理。4、常用试剂及其配方：▲DEPC水：在1000m ...

1.Oligotex mRNA Kits (QIAGEN）法 准备工作：1.将Oligotex Suspension 置于37℃水浴中，旋转混匀，溶解Oligotex.然后置于室温。2.将OBB Buffer置于37℃水浴中，旋转混匀，重溶沉淀物，然后置于室温。3.将OEB Buffer 置于70℃水浴中，待用。试验步骤： 表3：加入试剂量据此表Total RNARNase-free Wa ...

1. Superscipt II―RT合成第一链:1. 在一RNase-free的0.2ml PCR管中加入 xul mRNA(大约500ng) 1ul Xho I Primer(1.4ug/ul) (5’ GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAGTTTTTTTTTTTTTTTTTT…3’) 11- ...

1．pBlueScriptII的提取1．取1ul商品的pBlueScriptII，转化入大肠杆菌宿主菌中，取5ul转化产物均匀涂布在含AMP的LB平板上，37℃培养过夜。2．第二天取一只无菌的50ml离心管，加入10ml AMP抗性的LB液体培养基，挑单克隆于离心管中，37℃，250rpm，培养过夜。3．第三天取200µl小摇后的菌液接种于250ml 含AMP的LB液体培养基中，37℃，250rp ...

1.连接：根据载体和cDNA的电泳定量结果，每个样品设置3个比例的连接，即：insert/vector=1/3 incert/vector=1/1 insert/vector=3/1按以下体系依次加入： ddH2O xulT4 ligase 10x buffer 1ulPBK(E/X)vector(20ng/ul) 1ul ...

1．电转化感受态细胞的制备1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 ...

1．质粒快速鉴定 试剂：Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M 50mM NaCl &n

1．试剂及配方：2 x LB （1升）： 20g 氯化钠 20g 蛋白提取物 10g 酵母提取物 加入蒸馏水至1升，用NaOH调pH值至7.0，高压灭菌2 x LB－甘油（12.5%）（200ml）175ml 2 x LB液体25ml 甘油（100％）加入蒸馏水至200ml，压灭菌，置于4℃备用2．步骤1．将cDNA文库 ...

Preparation of Para-magnetic beads from Promega cat#Z5482:a) suspend magnetic particles in bottle - transfer 200 ul (200 ug) of beads per sampleof RNA to be purified to a microfuge tube or tubes.b) pl ...

AcknowledgementsThe organizer of the workshop acknowledges Dr. Murray Milford Professor and Interim Head and Dr. Mark Hussey Professor and Interim Associate Head Department of Soil and Crop Sciences ...

This protocol is designed to allow the use of 96-well trays (8x12 microtiter tray format) and multi-channel devices from the initial inoculation step to the final cycle sequence reaction. It will yie ...