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流式细胞术常用样品的制备方法

实验试剂 0.25%胰蛋白酶,无钙离子和镁离子的PBS液,70%乙醇,l%胃蛋白酶溶液 实验设备 倒置显微镜,培养瓶,吸管,离心管,4℃冰箱,剪刀,匀浆器,不锈钢网,流式细胞仪 实验步骤 1. 单层培养细胞单细胞悬液的制备 1) 弃去培养细胞(对数生长期)中的旧培养液,加入1~2ml 0.25%胰蛋白酶,倒置显微镜下观察,见细胞稍变圆时,停止胰蛋白酶作用。也可直接观 ...

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H33342释放法检测单核-巨噬细胞的胞毒作用

实验试剂 H33342 实验设备 1. 微量荧光"W"测量板(德国Dynatech公司产品) 2. 用自动微量荧光分析仪(Micro-FluoDynatech) 实验材料 靶细胞(L929细胞株,对单核细胞的杀伤活性敏感) 实验步骤 1. 从单个核细胞中采用粘附法分离的单核细胞,经非特异性酯酶(ANAE)和台盼蓝染色,细胞纯度应90%,细胞活力应95%;2. 收获靶 ...

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从外周血淋巴细胞中提取RNA

实验试剂 1. Ficoll(Amersham Biosciences)2.冰冷磷酸盐缓冲液(PBS),pH 7.43. 裂解缓冲液:5mol/L单巯基氰酸胍,10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),50mmol/L Tris—HCl,1mmol/L二硫苏糖醇(DTT),用0.45微孔滤膜过滤4. 4mol/L和3mol/L氯化锂,高压灭菌5.RNA溶解缓冲液:0.1%SDS,lmmol/ ...

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Isolation of Untouched Human B Cells by Depletion of Non-B Cells

实验原理 Add a mixture of biotinylated monoclonal antibodies (Antibody Mix) against the non-B cells to the starting sample. Add Depletion MyOne SA Dynabeads® to bind the non-B cells during a short incuba ...

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细胞膜蛋白的分离

实验试剂 1. 方法一缓冲液A:1mM KCl,5mM NaCl,3mM MgCl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM PMSF(PH=7.4) 缓冲液B:1mM KCl,5mM NaCl,3mM MgCl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM PMSF(PH=7.4),1mM EGTA 缓冲液 ...

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E.Z.N.A. Plant RNA Midi Protocol II (for difficult samples)

实验步骤 1. Grind plant sample. Collect frozen ground plant tissue (up to 500 mg) in a microfuge tube and immediately add 3.5ml Buffer RPL/2-mercaptoethanol. We recommend starting with 250 mg tissue at f ...

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免疫组化的操作规程

实验试剂 1. PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。 2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。 3. 0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O ...

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无菌感染期线虫的诱导培养

实验试剂 1. 琼脂糖(Agarose),进口分装,上海Yito公司;2. 胰蛋白胨(bacto-tryptone)、酵母浸出粉(bacto-yeast extract),英国OXOID公司;3. 琼脂粉,广东环凯微生物科技公司;4. DEPC,Bio Basic inc公司;5. LB培养基Tryptone 10 gYeast Extract ...

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Modified protocol for Isolating RNA from Grape Leaves

实验步骤 1. Ground sample with liquid nitrogen.2. Weight 10-50 mg ground sample into a tube contains 400 ul CPL Buffer. Mix the sample throughly by vortexing the tube 20 seconds.3. Add 400 ul chloroform ...

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分子杂交——Northern基因检测

实验试剂 1. 0.5M EDTA: EDTA 16.61g加ddH2O至80ml 调pH至8.0 定容至100ml。2.50mM NaAc: NaAc 3.4g 加ddH2O至500ml 加DEPC 0.5ml 振荡 37℃过夜,高压灭菌。3. 5×甲醛凝胶电泳缓冲液: MOPS 10.3g加50mM NaAc 400ml 用2N NaOH调pH至7.0 再加入0.5M EDTA 10ml ...

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E. Z. N.A.TM X-press Plasmid Protocol

实验试剂 Materials to Be Provided by User1. Ice 2. Isopropanol (100%) 实验设备 Materials to Be Provided by User1. Tabletop micro-centrifuge capable of 13000 x g2. Nuclease Free 1.5 and 2.0 mL Centrifuge ...

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Constructing a Low-budget Laser Axotomy System to Study Axon Regeneration in C. elegans

实验材料 NameCompanyCatalog NumberCommentsName of the reagentCompanyCatalogue numberComments (optional)535 nm LaserCrylasFDSS532Q3(TEEM Crystal and CRC also offer comparable lasers)All optics and hardwa ...

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0.1-2 Kb RNA Ladder

实验步骤 1.Formaldehyde Denaturing Gels 1)Pre-run a horizontal 1.5-2.5% agarose gel (2-3 mm lane width) containing 6% (w/v) formaldehyde 20 mM MOPS (pH 7.0) 1 mM EDTA submerged in buffer (20 mM MOPS ...

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Immunofluorescence: Rabbit Anti-Murine RELMα

实验步骤 The following protocol used B6 mice that were infected with 200 embryonated Trichuris muris eggs and sacrificed 15 days post-infection. The tip of the cecum was removed rinsed in 1X PBS pH 7.2 a ...

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完全基因剔除转基因动物

实验步骤 1. 基因剔除的技术路线 2. ES细胞 1) ES细胞在合适的体外培养条件下,可使细胞保持分化的全能性。 2) 已建立了非常完善的筛选体系,很容易获得同源重组的细胞群体。3. 构建打靶载体 1) 置换型载体 基本元件包括:与靶位点两侧同源的同源序列臂、正选择标记基因、细菌质粒序列和载体上同源臂外侧的线性化位点。 2) 插入型载体 主要元件包括:打靶位点的同源序 ...

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海洋不同生境总基因组DNA的提取

实验原理 由于环境样品种类繁多、组成复杂、物化性质多变,使得传统的对纯培养微生物提取DNA的方法很难直接应用到环境样品的研究中。近几年来己有多个实验室对从环境样品中提取DNA的方案进行了优化和评价。目前从环境样品中提取DNA的方法大体上分为两类:一类是原位(in situ)裂解法,直接裂解土壤样品中的微生物细胞,抽提DNA,该方法的优点是:操作容易、成本低、DNA的得率高,代表性好。缺点是:提出 ...

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重组毕赤酵母的表达

实验步骤 1. Mut 胞内或分泌表达:为检测表达条件是否有效,可培养GS115β-gal (Mut )(胞内表达-半乳糖苷酶)。亲代载体转化GS115 或KM71 作为胞内表达背景对照。 1) 挑取单克隆,接种至25mlMGY,BMG或BMGY中,(250ml摇瓶),28-30度,250-300rpm摇至OD600=2-6(对数生长,大约16-18小时)。 2) 室温15 ...

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微生物的培养特征观察

实验原理   微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上,可以呈丝线状、刺毛状、串珠状、疏展状、树枝状或假根状。生长在液体培养基内,可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中,可以沿接种线向四周蔓延;或仅沿线生长;也可上层生长得好,甚至连成一片, ...

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Using HTR Reagent to Clean Up DNA Samples with PCR Inhibitors

实验步骤 1. Vigorously mix the bottle of the HTR reagent for 30 seconds to ensure the particles are throughly resuspended. Add 100ìl of HRT reagent to 200 μl of sample and mix throughly by vortexing f ...

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Dynabeads® Mouse T-Activator CD3/CD28 – for physiological activation of mouse T cells

实验试剂 Buffer: Phosphate buffered saline with 0.1% bovine serum albumin and 2 mM EDTA pH 7.4 (PBS w/0.1% BSA). Magnet (DynaMag™): See www.invitrogen. com/magnets for magnet recommendations.Culture medi ...

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