细胞技术

(1)大鼠断颈处死后，无菌取脾置于消毒平皿中称重; (2)超净工作台上置10cm直径无菌平皿，加入5～10ml D-hanks平衡液 ，置一80目的不锈钢筛于平皿中，脾脏置于筛网中，用剪刀剪碎脾，用5ml玻璃注射器针芯轻轻捻磨脾脏，使分散的细胞滤过金属网进入平皿的液体中， D-hanks冲洗一次； (3)用吸管吸取冲洗液，200目的钢筛过滤一次后收集至离心管中； (4)1000rpm，离心5～10 ...

准备的药品：pbs199培养液，I型胶原酶（SIGMA）。 主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA用的动脉鞘的扩张管，6F或7F）。 首先，以PBS漂洗脐带1-2次，用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短（本人认为这个长度较为合适）。 之后，以止血钳提起一段脐带的一端，将鞘管插入脐静脉中，并经该鞘向静脉内注入PBS10-8ml左右（最后注入空气吹净残留液体），后以丝线将另一端结扎（一 ...

材料： 新鲜脐带 方法： 冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌胶原酶消化液（1mg/mL)，室温消化30min，1000rpm离心5min，弃上清，加1mg/mL胰蛋白酶3 ...

实验步骤 采血： 需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。 分离淋巴细胞： 采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液（已37℃预热），3000rpm离心30min。 收集白细胞层，转移至另一离心管中，加入10mL1640（含1%双抗），轻轻吹打均 ...

材料和方法 1、仪器： 手术器械一套，倒置显微镜（Leica）CO2细胞孵育箱（Heraeus），超净工作台（苏州净化设备有限公司），扫描电子显微镜（Hitachi）。 2、主要试剂 DMEM高糖培养基（Gibco），胎牛血清（Hyclone，杭州四季青生物工程材料公司），胰蛋白酶、EDTA（Ameresco）；小鼠抗人CD105单克隆抗体（NeoMarkers），兔抗人CD34、CD31多克隆抗 ...

一、设备： 无菌操作设备。 二、大型设备CO2培养箱： 恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值 倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况 解剖显微镜，用于准确地取材 常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶 低温冰箱：-20℃--80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂 电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿 高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械 过滤器：配制解剖液、培养液，必须过滤后才 ...

将出生2天以内的新生SD大白鼠10只，用75%的酒精浸泡消毒后，采用无菌方法迅速取出大脑，用冷的D-Hanks液清洗并剔除脑膜和血管，取大脑皮质，将组织剪碎为1mm3，用0.125%胰蛋白酶37ºC消化10分钟，过滤（200目尼龙滤网），离心（1000rpm 10分钟），去上清，加入DMEM/F12完全培养基（其中含10%胎牛血清，10%马血清，L-谷氨酰胺2mmol/L，青霉素100u ...

1、细胞培养所用溶液及其配制 1×RPMI1640及：按照产品说明配制，过滤除菌，4℃保存备用。 新生牛血清：56℃灭活30min，-20℃保存备用。 2×104U/ml青、链霉素液（双抗）：青链霉素各2×106 U溶于100ml灭菌双蒸水中，过滤除菌，分装，-20℃保存备用。 10×Na2EDTA-胰酶溶液（2.5%）：Na2EDTA 0.2g，N ...

一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平 ...

新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死，取脑放入冷的D-Hanks平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min，用含10% FBS的DMEM培养基终止消化，离心1000rpm 10min，去上清，再用含10% FBS的DMEM培养基重悬沉淀，经75µm筛网过滤，收集滤液，离心1000rpm ...

溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4、大瓶生理盐水 5、广口瓶（脐带数＋1） 6、止血钳（脐带数×2＋2） 7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶） 8、手术剪刀数把 使 ...

软骨细胞的原代培养 龄新西兰乳兔(雌雄不限，共18只，分6次处理)溺死，置于75％酒精溶液中10分钟，拿入超净工作台，自眼外眦至耳屏前剪开皮肤暴露皮下组织，再次严格消毒，自外眦外将颧弓由根部剪断，暴露髁状突，去净髁状突表面软组织及软骨膜，以眼科剪剪取髁状突表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30- ...

收集足月顺产或剖腹产新生儿脐带，保存于5%糖盐水中，4℃。(脐带在4℃ 5%糖盐水中保存时间不超过24h)。在超净工作台上将脐带取出，置灭菌弯盘中，用生理盐水冲洗脐静脉至冲出的液体不含红细胞。钳闭脐带一端，从另一端向脐静脉内注入37℃预热的0.25%胰蛋白酶，钳闭另一端。置37℃的生理盐水中10~15min。取出脐带，松开一端钳子，放出消化液，加入含15%新生小牛血清的M199培养基以终止反应。离 ...

1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液（亚硒酸钠40μg·L-1，腐胺16.2 mg·L-1，转铁蛋白100 mg·L-1，胰岛素234U·L-1，甲状腺素0.4μg·L-1，黄体酮0.62 mg·L-1，谷氨酰胺3g·L-1）。DMEM/F12培养基、小牛血清购自Hyclon ...

一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液，38℃±1℃消化，消化过程中不断 ...

1、肿瘤细胞培养问题： 问：我养的肿瘤细胞，传多少代以后不能用、需要重新复苏新的呢？我总觉得细胞形态不好，但长的还挺快！ 答：初代培养的细胞在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存，则需反复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10-50次左右，细胞增殖 ...

脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的重要成分，与外周血管内皮细胞不同，它具有高跨内皮阻抗（transendothelial electrical resistance，TER）、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有的特征，从而使血脑屏障形成一个限制大多数极性分子和蛋白质运动的选择性低渗透性的屏障。由于体外 ...

材料： 小鼠 器具： 饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管（15/50ml）、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器 试剂： DMEM（含血清）、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS 准备： 酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。 操作步骤： 1、将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS的平皿中。 2、 ...

器械： 饭盒、烧杯、弯头解剖剪（2）、小镊子（2）、平皿（4）、毛玻片、滤网、离心管（15ml）、移液管、培养瓶、废液缸、PE手套、橡胶手套、冰盒 溶液： PBS、DMEM（含血清）、DMEM（free）、胰酶 动物： 小鼠 准备： 用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束，提前半小时将培养液、胰酶37℃温浴。 培养过程： 1、两个圆皿中加入5ml的PBS培养液 ...

1、材料 猪甲状腺由锦州市屠宰场提供。F-12培养基（sigma公司）；胎牛血清（天津血液研究所）；胰蛋白酶（sigma公司）；胶原酶Ⅳ（sigma公司）；牛TSH　　　　　　（sigma公司） 2、方法 杀猪后迅速取出甲状腺1～2个，置于盛有75％酒精的烧杯中，用冰盒送至实验室（1小时以内）。立即置于pH为7.4的PBS缓冲液（含青链霉素）中，反复漂洗，直至漂洗液清澈透明。去除包膜及结缔组织，用 ...