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        脾脏单个核细胞悬液的制备

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        (1)大鼠断颈处死后,无菌取脾置于消毒平皿中称重;

        (2)超净工作台上置10cm直径无菌平皿,加入5~10ml D-hanks平衡液 ,置一80目的不锈钢筛于平皿中,脾脏置于筛网中,用剪刀剪碎脾,用5ml玻璃注射器针芯轻轻捻磨脾脏,使分散的细胞滤过金属网进入平皿的液体中, D-hanks冲洗一次;

        (3)用吸管吸取冲洗液,200目的钢筛过滤一次后收集至离心管中;

        (4)1000rpm,离心5~10min,弃上清;

        (5)加入约1ml双蒸水,吸管打匀后20s后加入等量的1.8%的NaCl溶液,然后加入大量D-hanks调节渗透平衡,以**红细胞,但对白细胞没有影响;用D-hanks液洗涤细胞2~3次,用含有1mM/L的谷氨酸胺、100IU/ml青霉素G、100μg/ml链霉素、10%的胎牛血清的RPMI-1640重悬细胞,调节细胞浓度为5×106/ml,台盼兰染色检测细胞存活率大于95%;

        (7)接种至培养板或培养瓶中。

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