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        新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞的原代培养

        互联网

        3907

        将出生2天以内的新生SD大白鼠10只,用75%的酒精浸泡消毒后,采用无菌方法迅速取出大脑,用冷的D-Hanks液清洗并剔除脑膜和血管,取大脑皮质,将组织剪碎为1mm3,用0.125%胰蛋白酶,37ºC消化10分钟,过滤(200目尼龙滤网),离心(1000rpm 10分钟)。

        去上清,加入DMEM/F12完全培养基(其中含10%胎牛血清,10%马血清,L-谷氨酰胺2mmol/L,青霉素100u/ml,链霉素100μg/ml)制成细胞悬液。

        计数后按5×105/cm2接种于培养瓶。贴附30min后,转移细胞悬液至新瓶中,加入DMEM/F12完全培养基,在37ºC, 5%CO2培养箱中培养9天(每3天更换培养液一次),第9天将培养瓶置于恒温旋转摇床上37ºC, 240rpm,摇18小时,去掉悬浮的细胞,用D-Hanks液清洗3次,进行传代培养即得纯化的星形胶质细胞。

        经免疫细胞化学法检测,98%以上的细胞GFAP免疫反应为阳性。

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