脐静脉内皮细胞原代培养

收集足月顺产或剖腹产新生儿脐带，保存于5%糖盐水中，4℃。脐带在4℃ 5%糖盐水中保存时间不超过24h。

在超净工作台上将脐带取出，置灭菌弯盘中，用生理盐水冲洗脐静脉至冲出的液体不含红细胞。钳闭脐带一端，从另一端向脐静脉内注入37℃预热的0.25%胰蛋白酶，钳闭另一端。置37℃的生理盐水中10~15min。

取出脐带，松开一端钳子，放出消化液，加入含15%新生小牛血清的M199培养基[含有85ml M199培养基(1000ml M199培养基，0.292g谷氨酰胺，3.0g Hepes ，2.0g NaHCO3)，15ml新生小牛血清，青、链霉素贮存液5μl，胰岛素1U]以终止反应。

离心800rpm×10min，弃上清。沉淀用含M199培养基稀释，以1×105的密度接种。

置于5%CO2孵箱中培养。每三天更换一次培养液，每天定时观察培养液的酸碱度和透明度。在相差显微镜下观察细胞贴壁和生长状况，直到细胞融合。