PCR技术

末代沙皇尼古拉二世、1918年的流行性感冒病毒、电影《侏罗纪公园》，以及辛普森杀妻案，这四件事情到底有什么相关？答案是没有。只不过近十几年来生物技术的一项新发明，把它们给连在一块了。这项技术就是“聚合酶链反应”（polymerase chain reaction，PCR）。PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁 ...

我要检测一个受体蛋白，提取的脑组织，Trizol提取组织RNA，加异丙醇离心后能见到明显的沉淀，按照TakaRa 的RNA LA PCR KIT(AMV) VER.1.1说明书操作，在逆转录后PCR不再加dNTP。逆转录后PCR用actin引物能模糊扩出一些东西，但有两条以上的带(第二次都快扩成100bpMARKER了！）。目的片段干干净净什么都没有！目的片断的引物一个是外国文献上的，一个 是自己设计的，都没有扩出来。小弟还菜，想大家给点建 ...

各位大侠：本人初涉分子生物之列，现在想做一个融合蛋白，希能得到指点。问题之一：1 ccgccagatt tgaatcgcgg gacccgttgg cagaggtggc ggcggcggca tgggtgcccc61 gacgttgccc cctgcctggc agccctttct caaggaccac cgcatctcta cattcaagaa121 ctggcccttc ttggagggct gcgcctgcac cccggagcgg atggccgagg ctggc ...

from sangon当PCR结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行：将PCR反应的试管与反应板紧贴。当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在0.2-ml的PCR管中不能均匀传热。不要随意减少dNTP的用量，它是一个系统的因素，必须与其它成份保持平衡。对于有问题的PCR反应，例如模板的量少，模板不纯和环状模板等，先尝试加Taq酶前的体系进行预变性，后加模板进行正常PCR扩增。 ...

A subset of SNPs that will represent the majority (90%) of the observed haplotypes but with minimal reduction in power to detect associations determined in earlier will be utilized for this aspect of the proposal. Multiplex and multiplex minisequencing will be utilized to genotype these SNPs ...

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术便是一种具 ...

PCR技术及其在临床诊断应用中的进展　　　王保龙　　聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）技术自1989年开始被应用于临床检验以来，以其快速、简便、灵敏等优点很快地成为临床实验诊断学的一个技术热点。目前，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。PCR技术虽然作为一种新生的高新技术而代表临床实验诊断学发展的又一里程碑，但十多年的临床实践表明，传统的PCR技术本身还存在着一些问题， ...

我做heparanaser的RT-PCR,请各位帮助验证引物cDNA序列为:1 atgctgctgc gctcgaagcc tgcgctgccg ccgccgctgc tgatgctgct gctcctgggg61 ccgctgggtc ccctctcccc tggcgccctg ccccgacctg cgcaagcaca gcaggacgtc121 gtggacctgg acttcttcac ccaggagccg ctgcacctgg tgagcccctc gttcc ...

Protocol for competitive RT-PCRFor quantifying mRNA, we use a competitive RT-PCR protocol with internal standard RNAs. These are added in a defined quantity to the RNA sample prior to the RT reaction. The resulting standard cDNA is coamplified with the same primers as the endogenous target seq ...

的2009年1-3月全文，持续更新（3月11日更新一期）《科学》09年3月06日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/babebccc-0dd3-11de-9021-0019d11a795f/重新整理一下，方便大家下载3月08日最新更新三期《自然》09年3月05日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/40b4522e-0b25-11de-b280-0014221 ...

　 有谁能帮我解决相对定量时内参和目标产物的扩增效率问题？我用的反应体系为50ul：１０＊PCR buffer 1 ＊(终浓度）　　　　　　　　　　２mmol/l　dNTP 0.2mmol/l每种TaQnase 5U/IU 1U/50ul25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/lintel reference Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/ltarget Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/lTemplate 0 ...

我设计了一对引物，用几个软件评价不一，哪位高手能否帮我检测一下？PA:ATCAAGCTTCACAGTCAGCCGCATGGPB:GCTTCTAGACCTCTGGCTGGCTTCTCAC我的序列：gcccgtacac accgtgtgct gggacacccc acagtcagcc gcatggctcc cctgtgcccc61 agcccctggc tccctctgtt gatcccggcc cctgctccag gcctcactgt gcaac ...

A. Pilot error hypothesis.Background:This is the most common problem with new people. It frequently happens a couple of weeks after someone is "trained" and when they start to work independently.Symptoms:- i) Other people in the lab have the same primers working on the same type of material, using the ...

realtime 做snp，对一些新手来说，也许在众多影响因素中，手法问题是一个比较常见的问题，本人属于初级菜鸟，在实验室才呆 不到3月，实验做了才不到半月，realtime做snp已经做了10板左右（96孔板），仅仅从图像上看，结果不满意者十有六七，主要的问题在于1:）荧光曲线起步没在起点，也就是说起点不整齐，线比较乱事业个问题。2）就是荧光曲线太平直，也就是说一些实验做的也许根本就没产物生成，虽说分型有，但是再重复做，有时 ...

PCR产物克隆方法平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用 ...

适用条件：RT-qPCR荧光定量。常用软件或网站：NCBI在线引物设计，IDT在线引物设计，sigma在线引物设计、primer3在线引物设计、primeprimer 5.0。根据我最近大半年来设计了无数对引物的经验来看，我想说的是，以上任何一种方法设计的引物几乎均可在一个较低的退火温度（例如52℃退火的三步法）下实现PCR扩增，只不过是扩增效率以及溶解曲线好与不好的差别。与其每次设计几个基因如果都从52℃开始摸索，且 ...

我要克隆一全长CDNA，设计引物如下sense:TCTCGGACCATGTCTCCCGCCCCA（起于104）antisense:CTA TCA GAC CTT GTC CAG CAG GGA（1841－1861）cDNA全长为：1 agttcagtgc ctaccgaaga caaaggcgcc ccgagggagt ggcggtgcga ccccagggcg61 tgggcccggc cgcggagccc acactgcccg gctgacccgg tggtctcgga cc ...

Reverse Tranase-PCRThis method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center.The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue, NIH.ReferencesRaineri, I., Moroni, C. and Senn, H.P. (1991).Improved e ...

综合性医药卫生1.中华医学杂志 2.第四军医大学学报 3.北京大学学报.医学版 4.第二军医大学学报 5.第三军医大学学报 6.解放军医学杂志 7.中国医学科学院学报 8.复旦学报.医学版 9.同济医科大学学报（改名为：华中科技大学学报.医学版） 10.白求恩医科大学学报（改名为：吉林大学学报.医学版） 11.湖南医科大学学报（改名为：中南大学学报.医学版） 12.华西医科大学学报（改名为：四川大学学报.医学版） 13.第一军医大学学报 14.苏州医学院学报（改名为：苏州大学学报. ...

http://fileho.com/download/a42426471683/PCR-TECHNOLOGY-Current-Innovations--SECOND-EDITION.rar.htmlPCR Technology: Current Innovations, Second Edition is a fundamental reference for scientists new to PCR technology and a source of up-to-date applicati ...