• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        我做的RT-PCR,没有结果,上火啊

        丁香园论坛

        1502
        我要检测一个受体蛋白,提取的脑组织,Trizol提取组织RNA,加异丙醇离心后能见到明显的沉淀,按照TakaRa 的RNA LA PCR KIT(AMV) VER.1.1说明书操作,在逆转录后PCR不再加dNTP。逆转录后PCR用actin引物能模糊扩出一些东西,但有两条以上的带(第二次都快扩成100bpMARKER了!)。目的片段干干净净什么都没有!目的片断的引物一个是外国文献上的,一个 是自己设计的,都没有扩出来。
        小弟还菜,想大家给点建议,体系、PCR过程、胶图如下:
        逆转录:
        MgCl2 4ul
        10×RNA PCR Buffer 2ul
        RNase Free dH2O 8.5ul
        dNTP Mixture(各10mM) 2ul
        RNase Inhibitor 0.5ul
        AMV Reverse Transcriptase 1ul
        Oligo dT-Adaptor Primer 1ul
        样品RNA 1ul
        30℃ 10min
        50℃ 30min
        99℃ 5min
        5℃ 5min
        PCR:
        MgCl2 1.2ul
        10×LA RNA PCR BufferⅡ 1.6ul
        (Mg2+ Free)
        灭菌蒸馏水 11.1ul
        TaKaRa LA Tag 0.1ul
        P1 1ul(10pmol)
        P2 1ul(10pmol)
        Templet 4ul
        94℃ 3min 1 cycle
        94℃ 30s
        56℃ 30s 30 cycle
        72℃ 40s

        72℃ 8min
        4℃ 保存
        我做的RT-PCR,没有结果,上火啊
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序