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        紧急!!!关于双重PCR的扩增效率

        丁香园论坛

        2618
          有谁能帮我解决相对定量时内参和目标产物的扩增效率问题?
        我用的反应体系为50ul:
        10*PCR buffer 1 *(终浓度)
                  2mmol/l dNTP 0.2mmol/l每种
        TaQnase 5U/IU 1U/50ul
        25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/l
        intel reference Primer 1F 1umol/l
        1R 1umol/l
        MGB probe 0.25umol/l
        target Primer 1F 1umol/l
        1R 1umol/l
        MGB probe 0.25umol/l
        Template 0.05ng--0.005ng
        循环条件:94 5min 1cycle -------- 95 30sec 60 30sec 45cycle
        在内参和目标基因初浓度一样的情况下,如何避免竞争抑制使两个基因的扩增效率一致且相对比值接近1呢?
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