材料与仪器
步骤
1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后；
2. 加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢）30 min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01 M PBS清洗5 min×3；
3. 加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01 M KPBS 100 ml）30 min，以增加细胞的通透性，0.01 M KPBS清洗5 min×3；
4. 加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00 g+0.01 M PBS 100 ml+叠氮纳0.08 g）稀释的一抗，4℃存放24-48 h；吸去抗体，0.01 M KPBS洗5 min×3；
5. 加入0.01 M KPBS稀释的的二抗，室温孵育2 h。0.01 M KPBS洗5 min×3；
6. 加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2 h，0.01 M KPBS洗5 min×3；蒸馏水迅速冲三次；
7. 加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30 min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01 M KPBS终止反应；
8. 梯度酒精脱水之后，封片，拍照。
来源：丁香实验
