石蜡切片免疫组化实验

1. 石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。 2. 取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需

1. 烤片：68℃，20 min。 2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯I20 min⇒二甲苯II 20 min⇒00%酒精10 min⇒100%酒精10 min⇒95%酒精5 min⇒80%酒精5 min⇒70%酒精5 min。 3. 阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10 min，PBS冲洗3X5 min。 4. 抗原修复：置0.01 M枸

1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后； 2. 加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢）30 min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01 M PBS清洗5 min×3； 3. 加入配好的0.3% Triton

一、洗载玻片 1. 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了是载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整，便于组织吸附。 2. 置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4（大约冲一个小时左右）。 3. 将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上，置于37℃温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷

免疫组化染色是免疫组化实验的核心步骤之一，其目的是通过抗原抗体特异性结合以及化学反应将抗原表达情况转化为可见的颜色信号。免疫组化染色的流程包括：脱蜡水化、抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗孵育、酶底物显色或荧光检测、封片观察等步骤。图：石蜡切片免疫组化染色流程图以微波炉热修复为例，展示石蜡切片组化染色实验流程：1、脱蜡处理将石蜡切片放置于二甲苯溶液中，分为两个染色缸，依次处理 20 min/缸后，依次