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        链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法

        相关实验:石蜡切片免疫组化实验

        最新修订时间:

        原理

        SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。

        材料与仪器

        步骤

        1.  烤片:68℃,20 min。
         
        2.  常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水:二甲苯I 20 min二甲苯II 20 min00%酒精10 min100%酒精10 min95%酒精5 min80%酒精5 min70%酒精5 min。
         
        3.  阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O37℃孵育10 min,PBS冲洗3X5 min。
         
        4.  抗原修复:置0.01 M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20 min),自然冷却20 min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5 min。
         
        5.  正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗。
         
        6.  滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5 min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);滴加生物素标记二抗,37℃孵育30 min,PBS冲洗3X5 min。
         
        7.  滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30 min,PBS冲洗3X5 min。
         
        8.  DAB/H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。

        来源:丁香实验

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