Thermo Fisher UltraPure™ 无 DNa

反转录过程中需要考虑哪些因素？

良好的反转录效果。 ❖ DTT，一种还原剂，通常用于提供最佳的酶活性。如果 DTT 或其他添加剂发生沉淀，会降低反应效率；因此，应溶解反应组分并充分混匀。 ❖ RNA 酶抑制剂通常包含在反应缓冲液中或单独被添加到反转录反应中，用于防止 RNA 降解。RNase 可能在 RNA 分离过程中被共同纯化，或者在反应体系配制期间被引入。已知的 RNase 有许多种，应根据其作用方式和反应要求选择合适的 RNA 酶抑制剂。 ❖ 反转录反应中使用的水应不含有核酸酶。最好选用商业化供应的无核酸酶水

【分享】分子生物学的一些基本技术

。 　　6、合并所有含质粒的洗脱液,用等体积的酚/氯仿(1:1)抽提,4℃下12000g离心2分钟,将上层水相转入新管。 　　7、加入2倍体积的冰冷无水乙醇，-20℃下沉淀10分钟,然后4℃下12000g离心10分钟,弃去上清液。 　　8、沉淀加70%乙醇洗涤,4℃下12000g离心10分钟,弃去上清液。 　　9、 沉淀真空抽干,重新溶于TE或无菌水中。 　　[注意] 在装柱过程中,要防止柱床中出现断裂或气泡现象,要使界面保持平整。对新装成的柱,应用含0.1% SDS的TE平衡, 以使柱

分子生物学常用实验技术（page 2)

mmol/L Tris?Cl ,pH7.2; 850mmol/L KCl; 44mmol/L MgCl2; 　　30mmol/L DTT; 0.5mg/ml BSA。 　　500μ RNase H 　　500μ DNA 聚合酶Ⅰ 　　100μ T4 DNA 聚合酶Ⅰ 　　2×1.25ml 不含核酸酶的水 　　以上所有试剂除对照RNA 需在-70℃保存外,其余均可保存于-20℃,可以合成40μg mRNA。 （一） 第一链合成 1. 试剂 　　[α-32 P